SARS-CoV-2 NSP8 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Spike-Glykoproteins

• Spike-Glykoprotein (S-Protein, auch bekannt als E2, Peplomer-Protein) ist ein wichtiges Oberflächenantigen von SARS-CoV-2, das für den Eintritt des Virus in Wirtszellen unerlässlich ist. Es liegt als Homotrimer vor und wird in die S1- (Rezeptorbindung) und S2- (Membranfusion) Untereinheiten gespalten. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086

• Die S1-Untereinheit bindet an Wirtsrezeptoren, hauptsächlich an das Angiotensin-konvertierende Enzym 2 (ACE2), und initiiert die Infektion. Die Bindung löst konformationelle Änderungen aus, die zur Membranfusion entweder direkt an der Zelloberfläche oder nach der Endozytose führen. Verwandte Referenzen: PMID:34561887 PMID:32075877 PMID:32221306 PMID:34903715

• Alternative Rezeptoren wie Neuropilin-1 (NRP1) und NRP2, Integrine oder ASGR1 können den Eintritt auf ACE2-unabhängige Weise vermitteln, was möglicherweise die Virustropismus im Riechepithel mit niedriger ACE2-Expression erklärt. Verwandte Referenzen: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059

• Die Spaltung des S-Proteins an der S2/S2'-Stelle durch Wirtsproteasen, einschließlich TMPRSS2 an der Zelloberfläche oder Cathepsin L in Endosomen, ist für die Aktivierung der Fusionsmaschinerie und die Freisetzung des viralen Genoms in das Zytoplasma unerlässlich. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616

• Als virales Fusionsprotein der Klasse I durchläuft S2 eine irreversible konformationelle Änderung von einem Prä-Fusionszustand zu einer postfusionalen Haarnadelstruktur, vermittelt durch Heptad-Wiederholungsregionen, die einen Trimer aus Haarnadeln bilden, was die Membranfusion antreibt. Verwandte Referenzen: PMID:34561887

• Strukturuntersuchungen zeigen, dass die Stieldomäne von S flexible Scharniere enthält, die eine orientierungsfreie Bewegung des Kopfes ermöglichen, was die Rezeptorengagement und die Immun evasion erleichtern könnte. Verwandte Referenzen: PMID:32817270

• Das Spike-Protein befindet sich auf der Virionmembran, der Membran des intermediären Kompartiments zwischen endoplasmatischem Retikulum und Golgi der Wirtszelle und der Wirtszellmembran. Es unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Glykosylierung und Palmitoylierung, und ist ein Schlüsselfaktor für die Virulenz.

• Wichtige funktionelle Schlüsselwörter umfassen die Anheftung des Virus an die Wirtszelle, die Fusion der Virusmembran mit der Wirtsmembran, virale Hüllproteine, Wirtszellmembran, Hemmung der angeborenen Immunantwort des Wirts, Superantigen und virale Immun evasion.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das den Aminosäuren 1-198 von SARS-CoV-2 NSP8 (YP_009742615.1) entspricht. Für Western Blot (WB) sollten Sie geeignete positive Kontrollen wie Lysate von SARS-CoV-2-infizierten Zellen oder rekombinantes NSP8 verwenden. Eine Optimierung der Antikörperverdünnung und der Detektionsbedingungen wird empfohlen.
• Für ELISA sorgen Sie für eine ordnungsgemäße Beschichtung mit dem Immunogen oder relevanten, von NSP8 abgeleiteten Peptiden. Validieren Sie den Test mit positiven und negativen Serumkontrollen. Aufgrund der polyklonalen Natur kann eine empfindliche Detektion erzielt werden, erfordert jedoch möglicherweise eine sorgfältige Titerbestimmung, um den Hintergrund zu minimieren.
• Da die Kreuzreaktivität für SARS-CoV-2 bestätigt ist, kann der Antikörper NSP8 von SARS-CoV-2-Varianten erkennen, aber spezifische Variantentests werden empfohlen. Erwägen Sie eine Epitop-Mapping, wenn eine präzise Reaktivität erforderlich ist.

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