Anti-SARS-CoV-2 NSP12 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P0DTD1

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SARS-CoV-2 NSP12 Funktion und Lokalisierung

• NSP12 ist die RNA-abhängige RNA-Polymerase (RdRp), die die Transkription viraler genomischer und subgenomischer RNAs katalysiert und für die SARS-CoV-2-Replikation essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• Zusammen mit den akzessorischen Proteinen nsp7 und nsp8 bildet NSP12 einen hoch prozessiven Replikationskomplex, der für eine effiziente RNA-Synthese erforderlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• Die Kinase-ähnliche NiRAN-Domäne von NSP12 fügt ein oder mehrere Nukleotide an den N-Terminus von NSP9 an und erzeugt so einen kovalenten RNA-Protein-Primer für den Start der Transkription. Verwandte Referenzen: PMID:37794589
• NSP12 führt eine diskontinuierliche Transkription durch, indem es an transkriptionsregulierenden Sequenzen (TRS) pausiert und zur Leader-TRS springt, was zur Produktion subgenomischer mRNAs führt. Verwandte Referenzen: PMID:35706445
• NSP12 ist eine Untereinheit des viralen RNA-Capping-Enzyms und katalysiert die Guanylyltransferase-Reaktion, die die Kern-Cap-Struktur GpppA-RNA bildet, die für die mRNA-Stabilität und Immunflucht entscheidend ist. Verwandte Referenzen: PMID:35944563
• Subzellulär lokalisiert NSP12 überwiegend im Zytoplasma der Wirtszelle und wird zu Doppelmembranvesikeln und perinukleären Replikationskomplexen rekrutiert, die vom endoplasmatischen Retikulum abgeleitet sind.
• Als zentraler Akteur bei der Coronavirus-Replikation ist NSP12 das Ziel wichtiger antiviraler Medikamente wie Remdesivir und Molnupiravir.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting beachten Sie, dass der Antikörper sowohl das volle Replikase-Polyprotein-Präkursor (~794 kDa) als auch das reife NSP12 nach proteolytischer Prozessierung detektieren kann. Es ist ratsam, die Detektion in SARS-CoV-2-infizierten Zelllysaten oder rekombinanten NSP12-exprimierenden Systemen zu validieren.
• Bei ELISA-Anwendungen kann die polyklonale Natur die Sensitivität erhöhen; jedoch sollte die Kreuzreaktivität mit nicht verwandten Proteinen oder anderen Coronaviren unter Verwendung geeigneter Kontrollen ausgeschlossen werden.
• Da es sich bei dem Immunogen um ein synthetisches Peptid handelt (Aminosäuren 200–300 von NSP12), bestätigen Sie, dass das Epitop unter Ihren Assay-Bedingungen (denaturiert vs. nativer Zustand) zugänglich bleibt.
• Für den intrazellulären Nachweis durch Immunfluoreszenz berücksichtigen Sie, dass NSP12 mit viralen Replikationskomplexen auf Wirtsmembranen assoziiert ist; Fixierung/Permeabilisierung müssen möglicherweise optimiert werden.

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