Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 polyklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Spike-Glykoproteins (S2-Untereinheit)

• Das Spike-Glykoprotein (S) ist ein Klasse-I-Virus-Fusionsprotein und das Hauptoberflächenantigen von SARS-CoV-2. Es vermittelt die anfängliche Bindung an Wirtszellen über die Bindung der Rezeptorbindungsdomäne (RBD) in der S1-Untereinheit an den Angiotensin-konvertierenden Enzym 2 (ACE2)-Rezeptor. Verwandte Referenzen: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Nach der Rezeptorbindung wird das S-Protein proteolytisch an der S2'-Stelle durch Wirtsproteasen wie die Transmembranprotease Serin 2 (TMPRSS2) oder Cathepsin L gespalten. Dies löst Konformationsänderungen in der S2-Untereinheit aus, die die Fusion der Virushülle mit der Wirtszellmembran antreiben. Verwandte Referenzen: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Das Virus kann auch alternative Eintrittsrezeptoren nutzen, darunter Neuropilin-1 (NRP1) und Neuropilin-2 (NRP2), die in olfaktorischen Epithelzellen stark exprimiert werden und Anosmie-Symptome erklären könnten; Integrine; und den Asialoglykoprotein-Rezeptor 1 (ASGR1) auf ACE2-unabhängige Weise. Verwandte Referenzen: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Subzelluläre Lokalisierung: Das S-Protein ist auf der Virionmembran vorhanden und durchläuft die ER-Golgi-Zwischenkompartiment (ERGIC)-Membran des Wirts; die Fusion findet an der Wirtszellmembran oder innerhalb von Endosomen statt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen umfangreiche N-verknüpfte Glykosylierung, Disulfidbrücken, Palmitoylierung und Spaltung in S1- und S2-Untereinheiten. Stichwörter aus UniProt: Virushüllenprotein, Transmembran, Glykoprotein, Wirt-Virus-Interaktion, virale Immunumgehung, Superantigen und Hemmung der angeborenen Wirtsimmunität.
• Die Stieldomäne des S-Proteins enthält drei flexible Scharniere, die eine erhebliche Orientierungsfreiheit des Rezeptorbindungs-Kopfes ermöglichen, ein Merkmal, das für die Immunevasion und Rezeptorbindung entscheidend ist. Verwandte Referenzen: PMID:32817270

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 1174–1273 der S2-Untereinheit umfasst (basierend auf der Referenzsequenz YP_009724390.1). Der Antikörper sollte sowohl das vollständige Spike-Protein (~141 kDa) als auch das S2-Spaltfragment erkennen.
• Für Western Blotting reduzierende SDS-PAGE-Bedingungen verwenden. Ein Band, das dem vollständigen Spike-Protein bei etwa 141 kDa entspricht, sollte sichtbar sein; es können auch niedermolekulare Bands auftreten, die S2-Spalttprodukte darstellen. Unter nicht-reduzierenden Bedingungen können höherwertige Oligomere (Trimere) nachgewiesen werden.
• Passende positive Kontrollen einbeziehen, wie Lysate aus SARS-CoV-2-infizierten Zellen oder rekombinantes Spike-Protein. Eine Ladekontrolle (z.B. GAPDH, β-Aktin) wird empfohlen.
• Für die Immunpräzipitation können Protein A/G-Kügelchen verwendet werden, die vorab mit dem Antikörper gekoppelt wurden, um die Detektion von Schwerkettent-Bands zu minimieren.
• In ELISA kann dieser polyklonale Antikörper als Fang- oder Detektionsreagenz in Sandwich-Assays zur Quantifizierung des Spike-Proteins dienen. Optimieren Sie Beschichtungskonzentrationen und Blockierpuffer für Ihr spezifisches Plattenformat.

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