Phospho-p53-S376 Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB, ELISA - P04637

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: p53-Funktion und -Lokalisierung

• Multifunktioneller Transkriptionsfaktor, der als Tumorsuppressor wirkt, indem er nach DNA-Schäden einen Zellzyklusstillstand oder Apoptose induziert. Funktioniert durch Bindung an spezifische DNA-Sequenzen zur Regulation der Expression von Zielgenen. Verwandte Referenzen: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724
• Vermittelt Apoptose teilweise durch transkriptionelle Aktivierung pro-apoptotischer Gene wie BAX und FAS sowie Repression des anti-apoptotischen Bcl-2. Die pro-apoptotische Aktivität wird durch Wechselwirkungen mit ASPP-Proteinen PPP1R13B und TP53BP2 moduliert, die durch den Inhibitor iASPP verdrängt werden können. Verwandte Referenzen: PMID:12524540, PMID:17189187
• Reguliert die Zellteilung negativ durch Kontrolle der Expression von Zellzyklus-Inhibitoren wie dem cyclin-abhängigen Kinase-Inhibitor p21 und kann die CDK7-Kinaseaktivität als Reaktion auf DNA-Schäden verhindern.
• Lokalisiert sich unter normalen Bedingungen im Zellkern, kann aber in das Zytoplasma, die Mitochondrien und andere Kompartimente translozieren; findet sich auch in nukleären PML-Körpern, Zentrosomen und dem endoplasmatischen Retikulum, was seine vielfältigen Funktionen widerspiegelt.
• Unterzieht sich zahlreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und Sumoylierung, die seine Stabilität, DNA-Bindung und transkriptionelle Aktivität regulieren.
• Wird ubiquitär in Geweben exprimiert; mehrere Isoformen werden durch alternatives Spleißen und die Nutzung von Promotoren erzeugt, von denen einige eine gewebsspezifische Expression und regulatorische Funktionen aufweisen (z. B. verstärkt Isoform 2 die Transaktivierung, unterdrückt Isoform 4 sie und hemmt Isoform 7 die Apoptose).
• Reguliert den zirkadianen Rhythmus durch Repression der CLOCK-BMAL1-vermittelten Aktivierung des PER2-Gens. Verwandte Referenzen: PMID:24051492
• Wirkt als wichtiger Tumorsuppressor, wobei Mutationen in TP53 mit dem Li-Fraumeni-Syndrom und vielen sporadischen Krebsarten in Verbindung gebracht werden, was seine kritische Rolle bei der Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phospho-Peptid erzeugt, das den Resten um S376 von menschlichem p53 entspricht. Stellen Sie eine korrekte Erkennung des Phosphorylierungsstatus sicher, indem Sie während der Zelllyse und Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren verwenden.
• Für Western Blots kann die Behandlung von Zellen mit DNA-schädigenden Mitteln (z. B. Doxorubicin oder UV-Bestrahlung) die Phosphorylierung von p53 bei S376 erhöhen und eine positive Kontrolle bieten. Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt ca. 44 kDa, aber aufgrund von Spleiß-Isoformen können mehrere Bänder auftreten.
• Verwenden Sie bei ELISA-Reaktionen rekombinantes p53-Protein, das bei S376 phosphoryliert ist, als Standard und validieren Sie die Assay-Spezifität mit nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen.
• Eine Kreuzreaktivität wurde mit menschlichem und Ratten-p53 bestätigt; für andere Arten wird vor der Verwendung eine Sequenzhomologieanalyse um S376 empfohlen.

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