Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Transkriptionsfaktors p65

• Proteinidentität und Komplexbildung: Der Transkriptionsfaktor p65 (RELA) ist eine Schlüsseluntereinheit des NF-kB-Transkriptionsfaktorkomplexes. Er bildet Homo- oder Heterodimere mit anderen Proteinen der NF-kB/Rel-Familie; das RELA-NFKB1-Heterodimer ist am häufigsten vorkommend und wirkt als transkriptioneller Aktivator.
• Kernbiologische Funktionen: NF-kB reguliert eine breite Palette biologischer Prozesse, darunter Entzündung, Immunität, Zelldifferenzierung, Proliferation und Apoptose. Es ist essenziell für die Zytokingenexpression in T-Zellen.
  Verwandte Referenzen: PMID:15790681
• Antivirale Reaktion: RELA fungiert als Schlüsseltranskriptionsfaktor in der Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion.
  Verwandte Referenzen: PMID:33440148
• Subzelluläre Lokalisierung und Aktivierung: In nicht stimulierten Zellen wird NF-kB im Zytoplasma durch I-kB-Inhibitorproteine gebunden. Nach Stimulation wird I-kB durch IKK phosphoryliert und abgebaut, wodurch RELA freigesetzt wird, in den Zellkern transloziert und die Transkription von Zielgenen aktiviert.
• Phosphorylierung an Ser536: Die RELA-Phosphorylierung an Ser536 ist eine kritische posttranslationale Modifikation, die die transkriptionelle Aktivität verstärkt, die nukleäre Lokalisierung fördert und die Interaktion mit Koaktivatoren modulieren kann.
• Weitere Modifikationen und Wirtsinteraktionen: Zusätzlich zur Phosphorylierung wird RELA durch Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und S-Nitrosylierung modifiziert und nimmt an Wirts-Virus-Interaktionen teil.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid erhoben, das den Resten um Ser536 des menschlichen RELA entspricht; es wird erwartet, dass er spezifisch die phosphorylierte Form des Proteins erkennt.
• Für das Western Blotting (WB) sollten Sie Zellen mit bekannten NF-kB-Aktivatoren (z. B. TNF-α, LPS) stimulieren, um die Ser536-Phosphorylierung zu induzieren. Fügen Sie Ihren Lysepuffern Phosphataseinhibitoren hinzu, um das Phospho-Epitop zu erhalten.
• Überprüfen Sie die Spezifität des Phosphosignals durch den Vergleich von stimulierten und nicht stimulierten Proben oder durch die Behandlung von Lysaten mit Lambda-Phosphatase vor der WB.
• Optimieren Sie für ELISA-Anwendungen die Testbedingungen für den Nachweis von Phosphoproteinen und erwägen Sie die Verwendung eines phosphospezifischen Nachweisantikörpers, um die Spezifität zu gewährleisten.
• Es wurde über Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus- und Ratten-RELA berichtet; bestätigen Sie die Reaktivität mit geeigneten Lysaten dieser Spezies.

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