Phospho-NFKB1-S337 Rabbit PolymAb® für WB - P19838

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NFKB1-Funktion und Lokalisierung

• NFKB1 kodiert den p105-Vorläufer, der einem Proteasom-vermittelten Prozess unterzogen wird, um die aktive p50-Untereinheit des NF-κB-Transkriptionsfaktorkomplexes zu erzeugen (PubMed:1423592). Verwandte Referenzen:
  PMID:1423592

• Die p50-Untereinheit bildet Homo- oder Heterodimere mit anderen Mitgliedern der NF-κB/Rel-Familie wie RELA/p65, RELB und REL, bindet die κB-Konsensus-DNA-Sequenz 5'-GGRNNYYCC-3' und reguliert so die Genexpression (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Verwandte Referenzen:
  PMID:1740106
  PMID:7830764

• NF-κB ist ein zentraler Mediator von Immun- und Entzündungsreaktionen, Zellwachstum, Differenzierung und Apoptose, wobei das p65-p50-Heterodimer der häufigste und transkriptionell aktivierende Komplex ist.

• Die inaktiven NF-κB-Dimere werden durch IκB-Inhibitoren im Zytoplasma zurückgehalten; nach Stimulation wird IκB phosphoryliert und abgebaut, wodurch NF-κB in den Nukleus translozieren und Zielgene aktivieren kann.

• NFKB1 fungiert auch über p105 als zytoplasmatischer Verankerungsanker für assoziierte NF-κB-Proteine und unterdrückt in Komplex mit MAP3K8 die MAPK-Signalübertragung, bis der p105-Abbau aktives MAP3K8 freisetzt.

• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Ubiquitinierung und Hydroxylierung, die seine Aktivität, Stabilität und subzelluläre Lokalisierung modulieren.

• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst sowohl Zytoplasma als auch Nukleus, was seine Doppelrolle bei der Signalsequestrierung und der transkriptionellen Regulation widerspiegelt.

• Durch alternatives Spleißen erzeugte alternative Isoformen tragen zur funktionellen Vielfalt bei; das vollständige p105-Protein (105 kDa) und die prozessierte p50-Untereinheit (50 kDa) werden in den meisten Zelltypen nachgewiesen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Angesichts der phosphospezifischen Natur dieses Antikörpers ist es unerlässlich, Phosphatase-Inhibitoren in die Lysepuffer aufzunehmen, um das Phosphorylierungssignal während der Probenvorbereitung zu erhalten.
• Für den Western Blot wird eine positive Kontrolle mit bekannter NF-κB-Pfad-Aktivierung (z. B. TNF-α-behandelte Zellen) empfohlen; die Detektion von Banden um 105 kDa (p105) und 50 kDa (p50) sollte überprüft werden.
• Bei der Immunhistochemie sollten die Antigen-Retrieval-Bedingungen und die Antikörperverdünnung optimiert werden; stellen Sie sicher, dass das Färbemuster die erwartete nukleare/zytoplasmatische Lokalisierung nach Pfadaktivierung widerspiegelt.
• Der Antikörper ist für ELISA geeignet; ziehen Sie die Verwendung eines phosphorylierten Peptids als Standard für quantitative Assays in Betracht.

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