Anti-ADARB1-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – P78563

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ADARB1

• ADARB1 (doppelsträngige-RNA-spezifische Editase 1), auch bekannt als ADAR2, DRADA2 oder RED1, gehört zur Familie der auf RNA wirkenden Adenosindeaminasen (ADAR), die die hydrolytische Desaminierung von Adenosin zu Inosin (A-zu-I-Editierung) in doppelsträngigen RNA-Substraten (dsRNA) katalysiert.
• Die A-zu-I-RNA-Editierung durch ADARB1 kann die Genexpression über mehrere Mechanismen modulieren, darunter die Veränderung von Codons und die Neucodierung von Proteinen, die Regulation des prä-mRNA-Spleißens, die Modulation der RNA-Stabilität sowie die Beeinflussung der Biogenese und Zielsteuerung von Mikro-RNAs.
• ADARB1 ist für die ortsselektive Editierung wichtiger neuronaler Transkripte verantwortlich, darunter Glutamatrezeptoren (GRIA2 an den Q/R- und R/G-Stellen, GRIK2), der Serotoninrezeptor (HTR2C), der GABA-Rezeptor (GABRA3) und der spannungsgesteuerte Kaliumkanal (KCNA1). Dies führt zu Aminosäureveränderungen, die die Eigenschaften von Ionenkanälen und Rezeptoren verändern.
• Das Enzym zeigt sowohl von der Editierung abhängige als auch unabhängige provirale Effekte auf die HIV-1-Replikation: Es editiert direkt die virale 5′-UTR und unterdrückt die Aktivierung von EIF2AK2/PKR, wodurch die Virusproduktion gesteigert wird.
• Alternatives Spleißen und die Nutzung alternativer Promotoren erzeugen mehrere Isoformen; Isoform 1 weist eine geringere katalytische Aktivität auf, während Isoform 2 in vitro eine höhere katalytische Aktivität zeigt.
• ADARB1 ist hauptsächlich im Zellkern und im Nukleolus lokalisiert, was mit seiner Rolle bei der ko-transkriptionellen und posttranskriptionellen RNA-Modifikation übereinstimmt.
• Die Expression ist im Gehirn und im Herzen am höchsten, mit niedrigeren Konzentrationen in Plazenta, Lunge, Leber und Niere; bei pädiatrischen Astrozytomen korreliert eine verringerte RNA-Editierungsaktivität mit dem Malignitätsgrad des Tumors.
• Das Protein enthält doppelsträngige-RNA-bindende Domänen (dsRBDs) und eine Desaminasedomäne mit einem koordinierten Zinkion und wird durch Phosphorylierung reguliert. Zu den Krankheitsassoziationen gehören geistige Behinderung (NEDHYMS) und eine Rolle bei der angeborenen antiviralen Immunität.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Fragment, das den Aminosäuren 180–380 des humanen ADARB1 (NP_001103.1) entspricht. Diese Region liegt innerhalb der N-terminalen katalytischen/Desaminasedomäne, und dagegen erzeugte Antikörper können das Zielprotein unter denaturierenden und nativen Bedingungen erkennen; es sollte in Betracht gezogen werden, die Reaktivität im jeweiligen Probentyp zu überprüfen.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt 81 kDa; bestätigen Sie das Migrationsverhalten mittels SDS-PAGE unter reduzierenden Bedingungen. Posttranslationale Modifikationen oder isoformspezifische Varianten können das scheinbare Molekulargewicht verändern.
• Verwenden Sie für den Western Blot (WB) geeignete Positivkontrollen, beispielsweise menschliches Gehirn, menschliches Herz oder Zelllinien, von denen bekannt ist, dass sie ADARB1 exprimieren. Die Kreuzreaktivität mit Orthologen von Maus und Ratte ermöglicht den Einsatz in Studien mit Nagetiermodellen.
• Bei ELISA-Protokollen kann es hilfreich sein, das Beschichtungsantigen und die Antikörpertitration zu optimieren. Die polyklonale Beschaffenheit ermöglicht eine empfindliche Detektion in Sandwich- oder indirekten ELISA-Formaten, wenn der Antikörper mit einem validierten monoklonalen Fangantikörper kombiniert wird.

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