Anti-HLTF-Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q14527

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HLTF-Funktion und Lokalisation

• HLTF (Helicase-like transcription factor) ist ein multifunktionales Protein, das DNA-abhängige ATPase-, E3-Ubiquitin-Protein-Ligase- und Chromatin-Remodellierungsaktivitäten kombiniert, kodiert durch das HLTF-Gen (auch bekannt als HIP116A, RNF80, SMARCA3, SNF2L3, ZBU1). Es spielt eine entscheidende Rolle bei der DNA-Schadens-Toleranz, epigenetischen Regulation und Transkription. Verwandte Referenzen: PMID:18316726 PMID:18719106 PMID:26051180
• Als Schlüsseleffektor in der Post-Replikations-Reparatur katalysiert HLTF die 'Lys-63'-verknüpfte Polyubiquitinierung von monoubiquitiniertem PCNA an 'Lys-164' bei genotoxischem Stress, was fehlerfreies Template-Switching zur Umgehung von DNA-Läsionen fördert. Verwandte Referenzen: PMID:18316726 PMID:18719106
• HLTF fungiert als epigenetischer Regulator, indem es an Histon H3 bindet, das an 'Lys-9' trimethyliert ist (H3K9me3), und die Histon-H3-'Lys-23'-Polyubiquitinierung (H3K23ub) vermittelt, die als Andockstelle für DNMT1 dient und so die replikationsgekoppelte DNA-Methylierungs-Erhaltung sicherstellt. Verwandte Referenzen: PMID:40680746
• Es zeigt ATP-abhängige dsDNA-Translokase-Aktivität ohne klassische Helicase-Aktivität, vermittelt Replikationsgabel-Umkehr durch Entwinden und Annealing von neu synthetisierten und elterlichen Strängen, um die DNA-Synthese zu unterdrücken und die genomische Stabilität aufrechtzuerhalten. Verwandte Referenzen: PMID:1994885
• HLTF kooperiert mit MSH2, um G-Quadruplex (G4)-DNA-Strukturen aufzulösen, was Replikationsstress und G4-Akkumulation während des gesamten Zellzyklus begrenzt. Verwandte Referenzen: PMID:39142279
• Es trägt zur Nukleotidexzisionsreparatur bei, indem es lösungsenthaltende Oligonukleotide unter Verwendung seiner HIRAN-Domäne entfernt und kann auch einzelsträngige DNA aus Triple-Strukturen durch ATP-abhängige Translokation verdrängen. Verwandte Referenzen: PMID:26051180 PMID:31960921
• Die subzelluläre Lokalisation ist überwiegend nuklear und chromosomen-assoziiert, was mit seinen Rollen in der DNA-Reparatur und Chromatin-Dynamik übereinstimmt.
• In mehreren Geweben exprimiert, einschließlich Gehirn, Herz, Niere, Leber, Lunge, Bauchspeicheldrüse, Plazenta und Skelettmuskel. Das Protein ist alternativer Initiierung, ATP-Bindung, Metallbindung (Zinkfinger), Methylierung und Phosphorylierung unterworfen, was seine Regulation durch multiple posttranslationale Modifikationen widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 900-1009 von humanem HLTF entspricht, eine Region, die für Spezifität ausgewählt wurde und wahrscheinlich unter denaturierenden Bedingungen zugänglich ist. Für WB sollten Sie Ganzzelllysate oder Kernextrakte aus humanen, murinen oder Rattens-Zelllinien verwenden, da Kreuzreaktivität bei diesen Spezies berichtet wurde.
• Aufgrund des großen vorhergesagten Molekulargewichts (~114 kDa) stellen Sie eine ausreichende Proteintrennung sicher, indem Sie geeignete Gel-Prozentsätze und verlängerte Transferzeiten während des Western Blottings verwenden.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; ziehen Sie die Paarung mit einem validierten, passenden Antikörper in Betracht, wenn Sie einen Sandwich-Assay entwickeln, und optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen für das synthetische Peptid oder rekombinante Target.
• Da HLTF multiple posttranslationale Modifikationen (Ubiquitinierung, Phosphorylierung, Methylierung) durchläuft, können Bandenverschiebungen beobachtet werden; validieren Sie die Fähigkeit des Antikörpers, modifizierte Formen im relevanten Probensystem nachzuweisen.

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