Anti-HLA-DR Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P01903

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HLA-DR

• Das Gen HLA-DRA kodiert die Alpha-Kette des Histokompatibilitätsantigens DR der HLA-Klasse II, die sich mit der Beta-Kette (HLA-DRB) zum funktionellen MHC-Klasse-II-Molekül auf antigenpräsentierenden Zellen verbindet.
• Der MHCII-Komplex präsentiert extrazelluläre Antigenpeptide (typischerweise 10–30 Aminosäuren) gegenüber CD4-positiven T-Zellen und steuert so die Effektorfunktionen von T-Helferzellen, die die antikörpervermittelte Immunität und Makrophagenaktivierung antreiben.
  Verwandte Literatur:
  PMID:15265931, PMID:15322540, PMID:17334368
• Im Tumormikromilieu präsentiert HLA-DR Peptide, die aus phagozytierten apoptotischen Tumorzellen oder durch Makropinozytose aufgenommenen sezernierten Tumorproteinen stammen, wodurch es mit der Krebsimmunüberwachung verbunden ist.
  Verwandte Literatur:
  PMID:31495665
• HLA-DR präsentiert außerdem Peptide aus Autolysosomen nach der Makroautophagie, ein Prozess der für die thymische T-Zellselektion und zentrale Immuntoleranz entscheidend ist.
  Verwandte Literatur:
  PMID:17182262, PMID:23783831
• Die Auswahl immunodominanter Epitope durch MHCII folgt zwei unterschiedlichen Verarbeitungswegen: „Zuerst binden, dann schneiden/trimmen“ für pathogenderivierte Peptide und „Zuerst schneiden, dann binden“ für Eigenpeptide.
  Verwandte Literatur:
  PMID:25413013
• Ein großer hydrophober Ankerrest an Position 1 des Peptids ist für die hochaffine Interaktion mit der MHCII-Bindungsfurche essenziell.
  Verwandte Literatur:
  PMID:8145819
• Subzellulär befindet sich HLA-DR auf der Zellmembran, wird aber auch durch das Endoplasmatische Retikulum und endosomale/lysosomale Kompartimente transportiert, darunter frühe und späte Endosomen, Lysosomen und Autolysosomen.
• Es wird überwiegend in professionellen antigenpräsentierenden Zellen exprimiert – Makrophagen, dendritischen Zellen und B-Zellen – sowie in thymischen Epithelzellen, wo es die T-Zell-Ausbildung vermittelt.
  Verwandte Literatur:
  PMID:15322540, PMID:23783831, PMID:31495665
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören ein Signalpeptid, eine einzelne Transmembranhelix, Disulfidbindungen und N-verknüpfte Glykosylierung; es unterliegt außerdem der Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das rekombinante Immunogen deckt die Aminosäuren 26–126 von humanem HLA-DRA ab und umfasst die N-terminale extrazelluläre Domäne; diese Region ist weniger polymorph als die Beta-Kette und kann eine breite Reaktivität gegenüber HLA-DR-Allelen vermitteln, aber eine Validierung im Zielzellsystem wird empfohlen.
• Für das Western Blotting ist unter reduzierenden Bedingungen eine Bande bei ca. 29 kDa zu erwarten; als Positivkontrolle empfehlen sich humane APC-abgeleitete Zelllinien (z. B. differenziertes Raji, THP-1) oder Gewebe mit hoher MHCII-Expression.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle optimiert werden, da das Ziel membranlokalisiert ist und auch in intrazellulären Kompartimenten (Endosomen/Lysosomen) nachgewiesen werden kann. Eine Co-Färbung mit einem Membranmarker ist ratsam.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Nachweisreagenz für lösliches HLA-DR oder Peptid-MHC-Komplexe geeignet sein; die Assaybedingungen sollten titriert werden, um Linearität und Spezifität zu gewährleisten.
• Beachten Sie, dass Kreuzreaktivität nur für Menschen angegeben wird; Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht garantiert. Bei der Verwendung mit Proben nicht-menschlicher Primaten sollte die Sequenzhomologie überprüft werden.

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