Acetyl-BRD4 (K332) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (SWISS O60885) | WB, ELISA - BRD4-Acetylierungsnachweis

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: BRD4-Funktion und -Lokalisierung

• BRD4 (Bromodomain-containing protein 4) ist ein Chromatin-Leser, der acetylierte Histone erkennt und eine zentrale Rolle im epigenetischen Gedächtnis und der Transkriptionsregulation spielt. Es bleibt während des gesamten Zellzyklus mit acetyliertem Chromatin assoziiert und hilft, die Chromatinarchitektur für die postmitotische Genexpression zu bewahren. Während der Interphase rekrutiert BRD4 den P-TEFb-Komplex an Promotoren und distale Enhancer, erleichtert die Phosphorylierung der RNA-Polymerase-II-CTD und die transkriptionelle Elongation. Es vermittelt auch die NF-kappa-B-Aktivierung durch Bindung an acetyliertes RELA und reguliert die p53-abhängige Transkription.
  Verwandte Referenzen: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19103749, PMID:23086925, PMID:23317504, PMID:23589332, PMID:24360279, PMID:29176719

• Ein Isoform von BRD4 fungiert als Chromatin-Isolator in der DNA-Schadensantwort, indem es Condensin-2 an acetylierte Histone rekrutiert und so die Ausbreitung der H2A.X-Phosphorylierung begrenzt.
  Verwandte Referenzen: PMID:23728299

• BRD4 lokalisiert sich vorwiegend im Zellkern und assoziiert mit acetyliertem Chromatin und mitotischen Chromosomen. Seine Chromatinbindung wird durch den Acetylierungsstatus der Histone reguliert, beeinflusst durch Signale wie die Aktivierung des JNK-Signalwegs.
  Verwandte Referenzen: PMID:16109376, PMID:21890894, PMID:25593309

• BRD4 ist ubiquitär exprimiert und unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung an mehreren Serinresten (z. B. S470, S484, S488, S492, S494, S498, S499, S503, S601, S1117, S1126, S1201, S1204) und Acetylierung an K1111. Dieser Antikörper erkennt spezifisch die Acetylierung an Lys332, eine Modifikation, die in UniProt noch nicht vollständig charakterisiert ist, aber auf Basis des Immunogen-Peptids entwickelt wurde.
  Verwandte Referenzen: PMID:12543779, PMID:18669648, PMID:19608861, PMID:23317504

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches acetyliertes Peptid, das Lys332 von menschlichem BRD4 umgibt und so eine spezifische Erkennung der acetylierten Form gewährleistet. Für den Western Blot sollten Sie Kerneextrakte aus menschlichen oder Maus-Zelllinien in Betracht ziehen und die Spezifität mit Peptid-Wettbewerbsassays unter Verwendung der acetylierten und nicht-acetylierten Peptide validieren.
• Für ELISA kann das acetylierte Peptid als Beschichtungsantigen dienen. Fügen Sie geeignete Kontrollen (nicht-acetyliertes Peptid, leere Wells) hinzu und optimieren Sie die Beschichtungskonzentrationen für das beste Signal-Rausch-Verhältnis.
• Die Reaktivität des Antikörpers kann vom Acetylierungsgrad abhängen, der je nach Zellbehandlung variieren kann (z. B. HDAC-Inhibitoren). Erwägen Sie die Stimulierung der Acetylierung, um den Nachweis zu verbessern.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in Ihrer spezifischen Probenmatrix; empfohlene Startkonzentrationsbereiche sollten empirisch ermittelt werden.
• Vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen; aliquotieren Sie und lagern Sie bei -20°C oder wie empfohlen.

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