BRD4-Kaninchen-Polyklonalantikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – O60885

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von BRD4

• BRD4 ist ein Bromodomänen-enthaltendes Protein, das als Chromatin-Reader fungiert. Es erkennt und bindet spezifisch acetylierte Histone, um das epigenetische Gedächtnis über Zellteilungen hinweg zu übertragen und die höhergeordnete Chromatinstruktur aufrechtzuerhalten. Zugehörige Referenzen: PMID:20871596 PMID:23086925 PMID:23317504 PMID:22334664 PMID:23589332

• Es spielt eine entscheidende Rolle bei der Transkriptionsregulation, indem es sich mit dem P-TEFb-Komplex verbindet und diesen zu den Promotoren signalinduzierbarer Gene rekrutiert, wodurch die Elongation der RNA-Polymerase II gefördert wird. Zugehörige Referenzen: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240

• BRD4 bindet außerdem an distale Enhancer, wo es mit JMJD6 zusammenarbeitet, um durch die Verdrängung negativer Regulatoren wie HEXIM1 und 7SK-snRNA einen aktiven P-TEFb-Komplex zu bilden. Zugehörige Referenzen: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240

• Das Protein vermittelt direkt oder indirekt die Phosphorylierung der C-terminalen Domäne (CTD) der RNA-Polymerase II an Serin-2, einem wichtigen Schritt bei der Transkriptionselongation. Zugehörige Referenzen: PMID:23086925 PMID:22509028

• Neben Histonen erkennt BRD4 acetyliertes RELA und erleichtert dadurch die NF-kappa-B-vermittelte Transkriptionsaktivierung. Zugehörige Referenz: PMID:19103749

• BRD4 wird nach der Phosphorylierung durch CK2 ebenfalls zu p53/TP53-Zielpromotoren rekrutiert und fungiert als Regulator der p53-abhängigen Transkription. Zugehörige Referenz: PMID:23317504

• Bei der DNA-Schadensantwort fungiert BRD4 als Chromatinisolator, indem es den Condensin-2-Komplex zu acetylierten Histonen rekrutiert und dadurch die Ausbreitung der H2AX-Phosphorylierung begrenzt.

• Auf subzellulärer Ebene ist BRD4 im Zellkern und im Chromatin lokalisiert. Es wird ubiquitär in verschiedenen Geweben exprimiert, was seine grundlegende Rolle in der Chromatinbiologie und Transkription widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen (Aminosäuren 700–794 des humanen BRD4) zielt auf eine Region außerhalb der konservierten Bromodomänen ab und kann dadurch eine Spezifität für BRD4 gegenüber anderen Mitgliedern der BET-Familie bieten. Die Kreuzreaktivität sollte jedoch im relevanten experimentellen System bestätigt werden.
• Bei Anwendungen im Western Blot sollte eine Bande bei etwa 152 kDa detektiert werden. Optimieren Sie die Antikörperverdünnung und die Belichtungszeiten, um klare Ergebnisse zu erzielen.
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) wird eine nukleäre BRD4-Färbung erwartet. Stellen Sie eine geeignete Fixierung und Antigen-Retrieval-Methode sicher, um die Zugänglichkeit des Epitops zu erhalten.
• Bei der Verwendung dieses Antikörpers im ELISA sollte das Immunogen-Peptid als Positivkontrolle eingesetzt und die Leistung über verschiedene Probentypen hinweg validiert werden.

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