Acetyl-Histon H4-K5 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (P62805) – Validierter Antikörper für WB, IHC-P, ELISA, ChIP

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H4-Funktion und Lokalisation

• Histon H4 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, die für das Wickeln und Kompaktieren von DNA zu Chromatin verantwortlich ist. Diese Kompaktierung schränkt die DNA-Zugänglichkeit ein und spielt somit eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

• Das Protein ist hauptsächlich im Zellkern lokalisiert und assoziiert mit Chromosomen. Es wurde beobachtet, dass es im Zellkern lokalisiert ist, wenn es in Schritt-11-Spermatozyten acetyliert ist. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

• Histon H4 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen (PTMs) an seinem N-terminalen Ende, die zusammen den "Histon-Code" bilden. Acetylierung an Lysin 5 (das Ziel dieses Antikörpers) ist eine Schlüsselmodifikation, die mit aktiven Chromatinzuständen assoziiert ist. Verwandte Referenzen: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861

• Zusätzliche Modifikationen umfassen Methylierung, Phosphorylierung und verschiedene Acylierungen, die zusammenwirken, um die Genexpression und andere DNA-templatgesteuerte Prozesse zu regulieren. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das die Aminosäuren 1-100 von humanem Histon H4 umfasst, einschließlich des N-terminalen Endes und des acetylierten Lys5-Epitops. Ziehen Sie die Verwendung von nicht-acetyliertem Peptid oder Mutante (K5A) als Negativkontrolle zur Bestätigung der Spezifität in Betracht.
• Western Blot (WB): Histon H4 hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~11 kDa. Stellen Sie eine ausreichende Trennung auf hochprozentigen SDS-PAGE-Gelen (z.B. 15-18%) sicher und überprüfen Sie die Bandenintensität, normalisiert auf Gesamt-Histon-Ladekontrollen (z.B. Histon H3, Gesamt-H4).
• Immunhistochemie-Paraffin (IHC-P): Antigen-Retrieval wird aufgrund der kompakten Natur von Chromatin empfohlen; Citratpuffer (pH 6,0) oder Tris-EDTA (pH 9,0) können getestet werden. Acetylierungsmuster können je nach Gewebe und Fixierungsbedingungen variieren.
• ELISA: Der Antikörper kann zum Nachweis von acetylierten Histon-Peptiden oder direkt auf Platten beschichteten, säureextrahierten Histonen verwendet werden. Optimieren Sie die Beschichtungskonzentration und Blockierschritte, um den Hintergrund zu minimieren.
• Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP): Geeignet für die genomweite Kartierung von H4K5ac-Loci. Die Vernetzungszeit und die Chromatin-Scherbedingungen sollten empirisch für jeden Probentyp bestimmt werden. Ein Post-ChIP-Western Blot wird zur Bestätigung der Anreicherung empfohlen.
• Kreuzreaktivität: Die Immunogen-Sequenz ist zwischen Human, Maus und Ratte hochkonserviert, und der Hersteller sagt eine breite Reaktivität voraus. Validieren Sie in Ihrer Spezies von Interesse durch Sequenzalignment und Vorversuche.

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