Monomethyliertes Histon H3-K79 Kaninchen-Polyclonale Antikörper (Q16695 / P68431) für WB, ELISA, ChIP

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von monomethyliertem Histon H3

• Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, das DNA verpackt und zu Chromatin kompaktiert. Diese Kompaktion schränkt die Zugänglichkeit der DNA ein und reguliert dadurch grundlegende nukleare Prozesse wie Transkription, DNA-Reparatur, Replikation und chromosomale Stabilität.
• Als zentrale Komponente des „Histon-Codes“ erfährt H3 zahlreiche stellenspezifische posttranslationale Modifikationen (PTM) – wie Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und Citrullinierung – die Chromatinstruktur und Genexpression feinabstimmen. Die Monomethylierung an Lysin 79 (K79me1) stellt eine dieser regulatorischen Markierungen dar, die mit Transkriptionskontrolle und epigenetischem Gedächtnis verbunden ist.
• Histon H3 lokalisiert sich hauptsächlich im Zellkern und ist ein integraler Bestandteil der Chromosomen. Beim Menschen existieren mehrere H3-Varianten: das kanonische, replikationsabhängige H3.1 (kodiert durch mehrere HIST1H3-Gene und P68431) sowie das testisspezifische H3.1t (Q16695), das selektiv in Hodenzellen exprimiert wird.
• Die genaue Funktion der K79-Monomethylierung ist kontextabhängig; sie wurde sowohl mit aktiven als auch repriimierten Chromatinumgebungen in Verbindung gebracht, und ihre fehlregulierte Steuerung ist mit Entwicklungsstörungen und Krebserkrankungen verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches monomethyliertes Peptid gezüchtet, das den Resten um K79 des menschlichen Histon H3 (NP_003520.1) entspricht – dies gewährleistet die Spezifität für die K79me1-Markierung.
• Western Blotting (WB): Für den Nachweis empfehlen sich nukleäre Proteinextrakte oder säureextrahierte Histone. Aufgrund des vorhergesagten Molekulargewichts von ca. 15 kDa sind Standard-SDS-PAGE- und Transferprotokolle geeignet. Testen Sie einen Bereich von Antikörperverdünnungen, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• ELISA: Verwenden Sie synthetische monomethylierte Peptide und passende Blockierungspuffer, um unspezifische Bindung zu minimieren. Fügen Sie unmodifizierte und andere modifizierte Peptide als Kontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP): Quervernetzungsbedingungen und Sonikation sollten sorgfältig optimiert werden, um die Methylmarkierung zu erhalten und eine passende Chromatinfragmentierung zu erreichen. Validieren Sie die Antikörperleistung in der relevanten Spezies (Mensch, Maus, Ratte) und zellulären Umgebung.
• Kreuzreaktivität: Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung der H3K79-Region wird eine Reaktion mit einem breiten Spektrum von Spezies vorausgesagt. Validieren Sie die Spezifität in Ihrem experimentellen System mit passenden Positiv- und Negativkontrollen.

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