ZAP70 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, ELISA - P43403

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ZAP70-Funktion und -Lokalisierung

• Tyrosin-Proteinkinase ZAP-70 (70 kDa Zeta-Ketten-assoziiertes Protein, Syk-verwandte Tyrosinkinase) wird vom ZAP70-Gen kodiert und existiert als alternativ gespleißte Isoformen.
• Fungiert als essentielle Signalkinase in der adaptiven Immunantwort: reguliert T-Zell-Aktivierung, Proliferation, Differenzierung, Motilität, Adhäsion und Zytokinexpression; trägt auch zur Thymozytenentwicklung und primären B-Zell-Aktivierung bei.
• Nach Stimulation des T-Zell-Rezeptors (TCR) wird ZAP70 zu phosphorylierten ITAM-Motiven von CD3E und CD3Z an der Plasmamembran rekrutiert, wo es durch LCK-vermittelte Phosphorylierung aktiviert wird. Aktives ZAP70 phosphoryliert Adapterproteine LAT und LCP2 und initiiert downstream-Signalübertragungskaskaden. Verwandte Referenzen: PMID:7509083
• Vermittelt die Internalisierung und den Abbau des TCR-Komplexes durch Interaktion mit der E3-Ubiquitin-Ligase CBL und den Adaptoren SLA/SLA2 und moduliert die Oberflächen-TCR-Expression und die Signaldauer.
• Subzelluläre Lokalisierung: Zytoplasma und Zellmembran; transloziert nach TCR-Engagement zur Plasmamembran.
• Gewebsspezifität: exprimiert in T-Zellen, natürlichen Killerzellen, frühen Thymozyten und pro/prä B-Zellen.
• Posttranslationale Modifikationen: Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung regulieren ihre Aktivität und Stabilität. Enthält SH2-Domänen und eine Kinasedomäne. Schlüsselwörter: 3D-Struktur, Phosphoprotein, Ubl-Konjugation, Isopeptidbindung, Krankheitsvariante, SCID.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 550-619 innerhalb der C-terminalen Kinasedomäne von menschlichem ZAP70 darstellt. Für Western Blot ist ein spezifischer Band um 70 kDa in menschlichen T-Zell-Linien (z. B. Jurkat) oder peripheren Blutmononukleärzellen (PBMCs) zu erwarten.
• Für die Immunfluoreszenz (IF-P) ist eine Permeabilisierung erforderlich, um intrazelluläres und membranassoziiertes ZAP70 nachzuweisen; erwägen Sie die Verwendung von T-Zell-Aktivatoren, um das Signal zu verstärken.
• In ELISA-Anwendungen validieren Sie die Antikörperleistung mit rekombinantem ZAP70-Protein oder Zelllysaten aus relevanten T-Zell-Proben; titrieren Sie optimal.
• Die berichtete Kreuzreaktivität gilt für den Menschen. Wenn Sie andere Spezies testen, überprüfen Sie die Sequenzkonservierung der Immunogenregion, insbesondere in der Kinasedomäne.

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