WNK3 Kaninchen mAb - Q9BYP7

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von WNK3

• WNK3 ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase der WNK-Familie (With No Lysine), die auch als PRKWNK3 bezeichnet wird. Sie stellt eine wichtige Upstream-Komponente der WNK-SPAK/OSR1-Kinasenkaskade dar.
• WNK3 reguliert die Elektrolythomöostase und die Zellvolumenerholung, indem sie die nachgeschalteten Kinasen OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK als Reaktion auf hyperosmotischen Stress phosphoryliert und aktiviert. Zugehörige Referenzen: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16501604 PMID:22989884
• Unter hyperosmotischen Bedingungen fungiert WNK3 als Sensor für molekulare Verdichtung und durchläuft eine flüssig-flüssig Phasentrennung zur Bildung membranloser Kompartimente. Diese konzentrieren die Kinase zusammen mit ihren Substraten und fördern so eine effiziente Signaltransduktion. Zugehörige Referenzen: PMID:36318922
• Die aktivierten Kinasen OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK phosphorylieren anschließend Kationen-Chlorid-Kotransporter: Sie aktivieren Na-K-Cl-Kotransporter (z. B. SLC12A2/NKCC1) und hemmen K-Cl-Kotransporter (z. B. SLC12A4/KCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), was gemeinsam die regulatorische Volumenzunahme vermittelt. Zugehörige Referenzen: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16357011
• WNK3 phosphoryliert zudem WNK4 und potenziell NEDD4L, wodurch die NCC-Aktivität (SLC12A3) moduliert werden kann. Unabhängig von seiner Kinaseaktivität kann WNK3 als Gerüstprotein wirken und die Membranlokalisation von Kanälen wie KCNJ1 und SLC26A9 negativ regulieren. Zugehörige Referenzen: PMID:16357011 PMID:17975670 PMID:20525693 PMID:17673510
• WNK3 verstärkt den TRPV5- und TRPV6-vermittelten Calciumeinstrom, indem es deren Membranexpressionslevel über einen kinaseabhängigen Mechanismus erhöht. Zugehörige Referenzen: PMID:18768590
• Das Protein lokalisiert überwiegend im Zytoplasma.
• WNK3 wird breit im erwachsenen Gehirn, Lunge, Niere, Leber und Pankras sowie in fötalen Geweben exprimiert. Isoform 1 ist gehirnspezifisch, während Isoform 3 nierenspezifisch ist. Mutationen in WNK3 wurden mit geistiger Behinderung in Verbindung gebracht.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einem C-terminalen Peptid (Aminosäuren 1700-1800), das eine Region targetiert, die wahrscheinlich gut exponiert ist und sich zum Nachweis des vollständigen Proteins eignet.
• Für das Western Blotting empfehlen wir die Verwendung eines SDS-PAGE-Gels mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6–8%), um das große 198 kDa-WNK3-Protein effektiv aufzutrennen, sowie die Zugabe geeigneter Molekulargewichtsmarker.
• Die Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus und Ratte deutet auf ein konserviertes Epitop hin; dennoch wird eine Validierung in der jeweiligen Spezies und Probensystem empfohlen.
• Der Antikörper ist neben WB auch für IHC-P und ELISA geeignet; eine Optimierung der Antigen-Retrieval-Methoden und Antikörperverdünnungen für jede Anwendung und Gewebeart wird angeraten.
• Da die WNK3-Signalgebung unter hyperosmotischem Stress aktiviert wird, sollten Sie bei der Untersuchung der Pathway-Aktivierung eine Vorbehandlung von Zellen oder Geweben mit hyperosmotischen Stimuli (z. B. Saccharose) in Betracht ziehen, um den Nachweis phosphorylierter nachgeschalteter Targets zu verbessern.

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