Vinculin Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P18206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Vinculin-Funktion und -Lokalisierung

• Vinculin ist ein Aktinfilament (F-Aktin)-bindendes Protein, das eine zentrale Rolle sowohl bei der Zell-Matrix-Adhaesion (fokale Adhaesionen) als auch bei der Zell-Zell-Adhaesion (Adhaerens Junctions) spielt.
• Es potenziert die Mechanosensorik durch Regulation der Expression von E-Cadherin an der Zelloberfläche und Stabilisierung des E-Cadherin-Komplexes, was zur Zellmorphologie und -lokomotion beiträgt.
• Das Protein lokalisiert sich an mehrere subzelluläre Orte, einschließlich fokaler Adhaesionen, Adhaerens Junctions, Podosomen, dem perinukleären Zytoskelett und dem Sarkolemm in Muskelzellen.
• Ein muskelspezifisches Spleiß-Variant, Metavinculin (MV), entsteht durch alternatives Spleißen des VCL-Gens und enthält ein zusätzliches Exon, was zu einer größeren Isoform mit einzigartigen Funktionen in Herz- und glatter Muskulatur führt.
• Posttranslationale Modifikationen wie Phosphorylierung, Acetylierung und Palmitoylierung regulieren die Vinculin-Aktivierung, Zielsteuerung und Proteininteraktionen.
• Mutationen im VCL-Gen sind mit Kardiomyopathien verbunden, einschließlich dilatativer Kardiomyopathie (CMD1W) und hypertropher Kardiomyopathie (CMH15), was seine kritische Rolle für die Integrität der Herzmuskulatur unterstreicht.
• Vinculin dient als Knotenpunkt für zahlreiche Bindungspartner (z. B. Talin, α-Actinin, Paxillin) und integriert mechanische und chemische Signale an Adhaesionsstellen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (Aminosäuren 751–850), die zwischen Vinculin und Metavinculin konserviert ist; daher wird erwartet, dass der Antikörper beide Isoformen erkennt, sofern nicht anders angegeben.
• Für das Western Blotting wird ein Band bei ca. 124 kDa erwartet; validieren Sie die Spezifität unter Verwendung von Lysaten aus menschlichen, murinen oder rattigen Zelllinien, die bekanntermaßen Vinculin exprimieren (z. B. HeLa, NIH/3T3 oder C2C12).
• Optimieren Sie in der Immunfluoreszenz/Immunzytochemie die Fixierung (z. B. 4 % Paraformaldehyd) und Permeabilisierung, um Strukturen der fokalen Adhaesion zu erhalten; eine Co-Färbung mit F-Aktin oder Paxillin kann als positiver Kontrolle dienen.
• Für ELISA可以考虑 ein direktes oder Sandwich-Format; führen Sie Titrationsversuche durch, um die optimale Beschichtung und Antikörperkonzentrationen für Ihre spezifische Platte und Ihr Nachweissystem zu bestimmen.
• Bei der Arbeit mit Muskelgeweben sollten Sie beachten, dass Metavinculin mit einem höheren Molekulargewicht wandert und eine differenzierte Expression aufweisen kann; fügen Sie entsprechende Kontrollen ein.

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