USP9X Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q93008

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: USP9X-Funktion und -Lokalisierung

• USP9X (Ubiquitin-Carboxyl-terminale Hydrolase 9X), auch bekannt als FAF, FAM, hFAM, DFFRX, MRX99, ist eine große Deubiquitinase-Enzym, das durch das auf dem X-Chromosom lokalisierte USP9X-Gen kodiert wird. Es gehört zur Peptidase-C19-Familie der Ubiquitin-spezifischen Proteasen.
• Als Thiolprotease hydrolysiert USP9X spezifisch Polyubiquitinketten mit einer Präferenz für Lys-11-Verknüpfungen, gefolgt von Lys-63, Lys-48 und Lys-6-Verknüpfungen, und entfernt dadurch Ubiquitin von Zielproteinen und reguliert den Proteinumsatz. Verwandte Referenzen: PMID:30914461
• USP9X ist eine essentielle Komponente der TGF-beta/BMP-Signalkaskade, wo es monoubiquitiniertes SMAD4 deubiquitiniert, der E3-Ubiquitin-Protein-Ligase TRIM33 entgegenwirkt und die Signaltransduktion fördert. Verwandte Referenzen: PMID:19135894
• In der Mitose reguliert USP9X die Chromosomenausrichtung und -segregation, indem es die Lokalisierung von BIRC5/Survivin an mitotische Zentromere kontrolliert und so eine ordnungsgemäße Zellteilung gewährleistet. Verwandte Referenzen: PMID:16322459
• USP9X deubiquitiniert und stabilisiert mehrere Proteine, die an der DNA-Reparatur (ALKBH3), RNA-Demethylierung (ALKBH5) und mTORC2-Komplexassemblierung (RICTOR) beteiligt sind, was seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:25944111 PMID:37454738 PMID:33378666
• Das Enzym ist auch am Peroxisomen-Import durch Deubiquitinierung von PEX5 beteiligt, setzt die zirkadiane Uhr über BMAL1-Stabilisierung zurück und hemmt den Hippo-Signalweg durch AMOTL2-Deubiquitinierung. Verwandte Referenzen: PMID:22371489 PMID:29626158 PMID:26598551 PMID:34404733
• Subzellulär lokalisiert USP9X im Zytosol, in Wachstumskegeln und im Ziliumaxonem, was mit seinen Rollen in der neuronalen Entwicklung und Zellmigration übereinstimmt.
• Weit verbreitet in embryonalen und adulten Geweben exprimiert, sind Mutationen in USP9X mit X-chromosomaler geistiger Behinderung (MRX99, XLID99) assoziiert, was seine Bedeutung für die Neuroentwicklung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa 1-100) von humanem USP9X; der Antikörper kann sowohl vollständiges USP9X als auch N-terminale Fragmente erkennen. Berücksichtigen Sie dies bei der Interpretation von Bandenmustern im Western Blot.
• Aufgrund des hohen Molekulargewichts von USP9X (~290 kDa) verwenden Sie SDS-PAGE-Gele mit niedrigem Prozentsatz (z.B. 6%) und verlängerte nasse Transferzeiten (z.B. über Nacht bei 4°C) für optimale Auflösung und Transferleistung im WB.
• Für IHC-P und IF/ICC werden standardmäßige Antigen-Retrieval-Techniken (hitzeinduziert mit Citrat- oder EDTA-Puffer) empfohlen, jedoch sollten die Fixierungsbedingungen für den spezifischen Probentyp validiert werden.
• Im ELISA kann das synthetische Peptid-Immunogen als positive Kontrolle dienen; jedoch sollte die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-USP9X überprüft werden, wenn Nagetierproben verwendet werden.

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