Ubiquityl-Histon H2A-K119 (P04908/P0C0S8) Kaninchen-poliklonaler Antikörper für WB und ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H2A Typ 1

Funktion von Histon H2A

Histon H2A ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin einwickelt und kompaktiert. Diese strukturelle Rolle schränkt die Zugänglichkeit von DNA ein und reguliert dadurch zentral Transkription, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomale Stabilität. Die Zugänglichkeit von DNA wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs), der als „Histon-Code“ bekannt ist, sowie durch Nukleosomen-Remodellierung moduliert.

Subzelluläre Lokalisation

Histon H2A lokalisiert hauptsächlich im Zellkern und assoziiert mit Chromosomen.

Posttranslationale Modifikationen

Histon H2A unterliegt umfangreichen PTMs, darunter Acetylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und Ubiquitinierung. Spezifische annotierte Modifikationen umfassen:

• N-terminale Acetylierung an Ser-2.
• Phosphorylierung an Ser-2 durch RPS6KA5.
• Citrullinierung an Arg-4.
• An Lys-119, der Rest, der von diesem Antikörper targetiert wird, wurden mehrere Acylierungen identifiziert: Hydroxyisobutyrylierung, Beta-Hydroxybutyrylierung, Crotonylierung und Glutarylierung. Das Schlüsselwort „Ubl-Konjugation“ in UniProt bestätigt, dass an dieser Stelle auch Ubiquitinierung stattfindet.

Verwandte Referenzen: PMID:11709551, PMID:15823041, PMID:16457589, PMID:15010469, PMID:24681537, PMID:27105115, PMID:21925322, PMID:31542297

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches ubiquityliertes Peptid rund um K119 des menschlichen HIST1H2AB (UniProt P04908/P0C0S8). Dieses Design deutet auf eine Spezifität für die ubiquitylierte Form hin; überprüfen Sie die Spezifität mit geeigneten Kontrollen (z. B. Vergleich mit unmodifiziertem Peptid oder Lysaten aus Zellen mit modulierter Ubiquitinierung).
• Für Western Blot (WB) erwägen Sie die Extraktion von Histonen mit säurebasierten Extraktionsprotokollen, um Histonproteine anzureichern. Das vorhergesagte Molekulargewicht des unmodifizierten Proteins beträgt etwa 14 kDa; Ubiquitinierung fügt ~8,5 kDa hinzu, sodass eine Bande um 23 kDa beobachtet werden kann.
• Für ELISA können Direkt- oder Sandwich-Formate verwendet werden. Erwägen Sie die Beschichtung mit dem ubiquitylierten Peptid oder mit rekombinantem ubiquitylierten Histon H2A, um die Antikörperbindung zu beurteilen.
• Aufgrund der breiten vorhergesagten Kreuzreaktivität (Mensch, Maus, Ratte und andere) validieren Sie den Antikörper in Ihrem spezifischen Proben-system vor der Hochskalierung.

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