Ubiquitin Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P0CG47

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Ubiquitin

• Ubiquitin wird durch das UBB-Gen kodiert und als Polyubiquitin-B produziert, ein Vorläuferprotein, das prozessiert wird, um reife Ubiquitin-Monomere zu erzeugen. Ubiquitin ist ein hochkonserviertes 76-Aminosäuren-Protein, das an der posttranslationalen Modifikation von Zielproteinen beteiligt ist.
• Ubiquitin existiert entweder kovalent an andere Proteine gebunden oder frei (nicht verankert). Wenn es kovalent gebunden ist, wird es über eine Isopeptidbindung an Zielproteine konjugiert, wobei es Monomere (Monoubiquitin) oder Polyubiquitinketten bildet, die über unterschiedliche Lys-Reste verknüpft sind (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) oder lineare Ketten, die über das Initiator-Met verknüpft sind.
• Unterschiedliche Polyubiquitinketten-Verknüpfungen bestimmen unterschiedliche zelluläre Ergebnisse: Lys-48-verknüpfte Ketten lenken Proteine zum proteasomalen Abbau, während Lys-63-verknüpfte Ketten an Endozytose, DNA-Schadensantworten und NF-kappa-B-Signalwegen beteiligt sind. Andere Verknüpfungen (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) beteiligen sich an DNA-Reparatur, ERAD, Zellzyklusregulation und Kinase-Modifikation.
• Neben konjugierten Formen haben auch freie, nicht verankerte Polyubiquitinketten Signalfunktionen, wie die Aktivierung von Proteinkinasen und die Modulation anderer Signalwege.
• Ubiquitin lokalisiert sich in mehreren subzellulären Kompartimenten einschließlich Zytoplasma, Zellkern und äußere Mitochondrienmembran, was seine breite Beteiligung an zellulären Prozessen widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen von Ubiquitin selbst umfassen Phosphorylierung und ADP-Ribosylierung, die seine Funktion modifizieren können. Das Protein enthält eine Isopeptidbindung und ist Teil des Ubl-Konjugationswegs.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die volle Länge von Ubiquitin (Aminosäuren 1-228), entsprechend dem Polyubiquitin-B-Vorläufer. Es wird erwartet, dass dieser polyklonale Antikörper sowohl freies Ubiquitin als auch Ubiquitin-konjugierte Proteine erkennt, aber er kann auch Polyubiquitinketten nachweisen. Bei WB erwägen Sie die Verwendung denaturierender und reduzierender Bedingungen, um monomeres Ubiquitin von Polyubiquitin-Konjugaten zu unterscheiden.
• Für IHC-P kann Antigen-Retrieval die Detektion verbessern, und geeignete Kontrollen (z. B. Verwendung von Knockdown- oder Knockout-Proben) sind empfehlenswert, um die Spezifität zu bestätigen. Das Signal kann aufgrund der weiten Verbreitung von Ubiquitin diffus sein.
• Bei IF/ICC sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden optimiert werden, da die Ubiquitin-Lokalisation zwischen den Kompartimenten variiert. Co-Färbung mit Organellen-Markern kann die Interpretation erleichtern.
• ELISA-Protokolle sollten Standardkurven mit rekombinantem Ubiquitin enthalten, um den Gehalt an freiem oder totalem Ubiquitin zu quantifizieren. Stellen Sie sicher, dass der Antikörper für das spezifische Assayformat und den Probentyp validiert ist.
• Der Antikörper weist eine vorausgesagte breite Kreuzreaktivität auf. Für nicht-menschliche Spezies validieren Sie die Reaktivität im entsprechenden Proben-system, da die Sequenzhomologie hoch ist, aber variieren kann.

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