Ubiquitin-Kaninchen-pAb - P0CG47

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Ubiquitin

• Das durch das UBB-Gen kodierte Polyubiquitin-B wird in mehrere Ubiquitinmonomere verarbeitet, die an Zielproteine konjugiert werden können.
• Die kovalente Anheftung von Ubiquitin (Monoubiquitinierung) oder Polyubiquitinketten an Proteine reguliert vielfältige zelluläre Prozesse. Die Verknüpfungstypen der Polyubiquitinketten bestimmen die funktionellen Auswirkungen: Lys-48-verknüpfte Ketten markieren Substrate für den proteasomalen Abbau; Lys-63-verknüpfte Ketten sind an Endozytose, DNA-Schadensreaktionen und der NF-kappa-B-Signalübertragung beteiligt; lineare Ketten nehmen an der Zell signalübertragung teil.
• Die Ubiquitin-Konjugation kann auch über andere Verknüpfungen (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) erfolgen, die an DNA-Reparatur, ER-assoziiertem Abbau, Stressreaktionen und der Modifikation von Kinasen beteiligt sind.
• Freie (nicht verankerte) Polyubiquitinketten wirken unabhängig bei der Aktivierung von Kinasen und der intrazellulären Signalübertragung.
• Das Protein befindet sich im Zytoplasma, im Zellkern und in der äußeren Membran der Mitochondrien.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung und ADP-Ribosylierung; außerdem bildet es Isopeptidbindungen mit Zielproteinen.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht dem vollständigen Ubiquitin (1-228), daher kann der Antikörper sowohl freies Ubiquitin als auch Ubiquitin-Konjugate erkennen. Im Western Blot wird freies Ubiquitin bei etwa 26 kDa nachgewiesen, während polyubiquitinierte Proteine als Schmieren mit hohem Molekulargewicht erscheinen.
• Für WB sollte eine Behandlung der Zellen mit einem Proteasominhibitor (z. B. MG132) in Betracht gezogen werden, um bei der Untersuchung des Abbaus polyubiquitinierte Spezies anzureichern.
• Validieren Sie die Spezifität mit geeigneten Negativkontrollen, beispielsweise durch einen siRNA-vermittelten Knockdown von Ubiquitin.
• Für IHC-P kann eine Antigenfreilegung erforderlich sein; optimieren Sie die Antikörperverdünnung und die Nachweisbedingungen anhand bekannter positiver Gewebe.
• Bei ELISA-Anwendungen kann es je nach Probentyp sinnvoll sein, sowohl direkte als auch Sandwich-Formate zu testen.

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