TriMethyl-Histon H4-K20 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB/IHC/IF (P62805)

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H4

Histon H4 ist eines der Kernhistone, die das Nukleosom bilden – die grundlegende Wiederholungseinheit der Chromatin. Zusammen mit den Histonen H2A, H2B und H3 bildet es ein Oktamer, um das etwa 147 Basenpaare DNA gewickelt sind. Dies komprimiert das Genom im Zellkern und reguliert die Zugänglichkeit der DNA. Histon H4 spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, der DNA-Reparatur, der DNA-Replikation und der chromosomalen Stabilität. Die dynamische Modulation der Chromatinstruktur wird größtenteils durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTM) an den Histonschwänzen erreicht, die gemeinsam als "Histon-Code" bezeichnet werden. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Histon H4 ist hauptsächlich im Zellkern lokalisiert und assoziiert mit Chromosomen. Acetyliertes H4 findet sich ebenfalls im Zellkern während bestimmter Stadien der Spermatogenese (Schritt 11 Spermatiden). Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Der Lysin-20-Rest von Histon H4 (H4K20) unterliegt mehreren Methylierungszuständen, darunter Mono-, Di- und Trimethylierung. Die Trimethylierung von H4K20 (H4K20me3) ist ein Kennzeichen konstitutiven Heterochromatins und ist an Gen-Silencing, die DNA-Schadensantwort und die Zellzyklusregulation beteiligt. Diese Modifikation wird dynamisch durch Methyltransferasen (z. B. SUV4-20H1/2) und Demethylasen reguliert. Zahlreiche weitere PTMs an H4 wurden durch Massenspektrometrie und andere Techniken nachgewiesen, was die Komplexität der Histonregulation unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das der trimethylierten K20-Region des menschlichen Histons H4 entspricht. Es wird erwartet, dass dieser Antikörper H4K20me3 spezifisch erkennt, aber Kreuzreaktivität mit anderen H4-Methylierungszuständen oder unmodifiziertem H4 sollte experimentell mithilfe geeigneter Peptid-Konkurrenzassays oder Knockout-/Knockdown-Modelle ausgeschlossen werden.
• Für den Western Blot (WB) Nachweis werden histoneangereicherte Kernextrakte oder säureextrahierte Histone als Probenart empfohlen. Optimieren Sie die Konzentration des primären Antikörpers (z. B. beginnen Sie mit 1:500–1:2000) und verwenden Sie ein geeignetes sekundäres Antikörperkonjugat.
• In der Immunhistochemie (IHC-P) kann Antigen-Retrieval mit Citratpuffer (pH 6,0) oder EDTA-Puffer (pH 8,0) die Epitopverfügbarkeit verbessern; optimieren Sie die Retrieval-Methode empirisch.
• Für Immunfluoreszenz (IF/ICC) wird Permeabilisierung mit 0,1–0,5 % Triton X-100 oder Digitonin empfohlen. Fixierungsbedingungen (z. B. 4 % PFA) können die Epitopzugänglichkeit beeinflussen; testen Sie verschiedene Protokolle.
• Bei der Verwendung in ELISA- oder Dot-Blot (DB)-Assays sollten Sie BSA-blockierte Platten und ein biotinyliertes Nachweissystem für verbesserte Empfindlichkeit verwenden.
• Fügen Sie immer eine Negativkontrolle hinzu (z. B. unmodifiziertes H4-Peptid oder IgG-Kontrolle) und validieren Sie die Antikörperspezifität im relevanten Probensystem mittels Massenspektrometrie oder anderen orthogonalen Methoden.
• Der Antikörper zeigt vorausgesagte breite Kreuzreaktivität (Mensch, Maus, Ratte und andere), aber eine Validierung für jede interessierende Spezies wird empfohlen.

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