TriMethyl-Histon H3-K64 (Q16695/P68431) Kaninchen-Polyclonaler Antikörper (WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA)

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, der grundlegenden Wiederholungseinheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und regulieren ihre Zugänglichkeit für die zelluläre Maschinerie, die für Prozesse wie Transkription, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und die Erhaltung der chromosomalen Stabilität erforderlich ist. Histone spielen daher eine zentrale Rolle für die Genomorganisation und -funktion. Die Zugänglichkeit der DNA wird dynamisch durch eine komplexe Vielfalt posttranslationaler Modifikationen (PTM) an Histonen – oft als Histon-Code bezeichnet – sowie durch Nukleosom-Remodellierungsaktivitäten gesteuert.

Zwei Isoformen sind durch die Swiss-Prot-Accessionen Q16695 und P68431 vertreten. Q16695 (Histon H3.1t, auch bekannt als H3t oder H3.4) ist eine hoden-spezifische Histon-H3-Variante, die hauptsächlich in Hoden-Zellen exprimiert wird, wo sie wahrscheinlich zur Chromatin-Umorganisation während der Spermatogenese beiträgt. P68431 (Histon H3.1) ist ein kanonisches, replikationsabhängiges Histon, das breit exprimiert wird und während der S-Phase auf neu synthetisierte DNA abgelagert wird. Beide Isoformen teilen eine umfangreiche Sequenzhomologie und unterliegen einer Vielzahl von PTMs, darunter Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und andere, die die Chromatinstruktur und -funktion modulieren.

Die Trimethylierung von Lysin 64 (K64) ist eine spezifische epigenetische Markierung innerhalb des Histon-H3-Schwanzes, obwohl ihre genauen biologischen Funktionen noch erforscht werden. Wie andere Histon-Methylierungsereignisse wird angenommen, dass sie die Genexpression beeinflusst, indem sie als Andockstelle für Effektorproteine dient oder die Chromatinkompaktierung verändert.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein synthetisches trimethyliertes Peptid, das der Region um Lysin 64 von Histon H3 entspricht (basierend auf NP_003520.1). Dieses Design ermöglicht die spezifische Erkennung des trimethylierten Zustands an dieser Aminosäure.
• Für Western Blot (WB) sollten Sie Gesamtzelllysate von Proben aus Mensch, Maus, Ratte oder anderen Wirbeltieren verwenden. Das vorausgesagte Molekulargewicht von ~15 kDa sollte unter reduzierenden und denaturierenden Bedingungen bestätigt werden.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) können Antigen-Retrieval-Methoden (z. B. hitzeinduzierte Epitop-Retrieval in Citratpuffer) erforderlich sein, um das Epitop freizulegen. Validieren Sie die Färbung in positiven und negativen Kontrollgeweben unter Berücksichtigung der hoden-spezifischen Expression der H3.1t-Isoform.
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten optimale Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen empirisch bestimmt werden. Die vorausgesagte breite Kreuzreaktivität macht diesen Antikörper geeignet für vergleichende Studien zwischen verschiedenen Spezies.
• Für ELISA kann der Antikörper verwendet werden, um trimethylierte H3-K64-Peptide oder rekombinante Proteine nachzuweisen. Sorgen Sie für geeignete Blockierungs- und Waschschritte, um unspezifische Bindung zu minimieren.

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