TriMethyl-Histon H3-K56 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, IF/ICC, ELISA, ChIP-seq

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3 (H3.1/H3.1t)

• Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin einwickelt und kompaktiert, um die DNA-Zugänglichkeit zu begrenzen. Es spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität.
• Die DNA-Zugänglichkeit wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs) an Histonen gesteuert, die zusammen als Histon-Code bezeichnet werden. Diese PTMs werden von Effektorproteinen erkannt, die Veränderungen des Chromatinzustands und Ergebnisse der Genexpression vermitteln.
• Die Trimethylierung von Lysin 56 (K56me3) ist eine spezifische PTM in der globulären Domäne von H3. Diese Modifikation kann Histon-DNA-Interaktionen innerhalb des Nukleosoms beeinflussen und steht im Zusammenhang mit der DNA-Schadensantwort und Chromatindynamik während der Replikation.
• Das kanonische Histon H3.1 wird ubiquitär exprimiert, während die Variante H3.1t (kodiert von H3-4/HIST3H3) eine hoden-spezifische Expression aufweist.
• Beide Isoformen lokalisieren zum Zellkern und assoziieren mit Chromosomen, was mit ihrer strukturellen Rolle bei der Chromatinorganisation übereinstimmt.

Verwandte Referenzen:

• Identifizierung von H3K56me3 durch Massenspektrometrie PMID:17194708
• Rolle von EHMT2 (G9a) bei der K56-Methylierung PMID:22387026
• Zusammensetzung des Nukleosom-Kernpartikels und Histonmodifikationen (Übersicht) UniProt-Eintrag

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Erwägen Sie die Verwendung eines Peptid-Konkurrenz-Assays sowohl mit trimethylierten als auch unmodifizierten K56-Peptiden, um die Spezifität des Antikörpers für die K56me3-Markierung zu bestätigen – insbesondere bei der Arbeit mit komplexen biologischen Proben.
• Für das Western Blotting validieren Sie die beobachtete Bande bei dem erwarteten Molekulargewicht von 15 kDa unter Verwendung von Kernextrakten aus der interessierenden Spezies und schließen Sie geeignete Beladungskontrollen und Molekulargewichtsmarker ein.
• In ChIP-seq-Experimenten schließen Sie eine Kontrollreaktion mit einem unmodifizierten Peptid oder einer antikörperblockierten Probe ein, um unspezifische Anreicherung auszuschließen. Eine Kreuzreaktivität über ein breites Spektrum von Spezies wird aufgrund der hohen Sequenzkonservierung von Histon H3 vorhergesagt, aber eine experimentelle Validierung in der Zielspezies wird empfohlen.
• Für IF/ICC-Anwendungen erwägen Sie eine Co-Färbung mit Markern für Chromatin oder spezifische nukleare Substrukturen, um die räumliche Lokalisation des Signals zu bestätigen.

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