TriMethyl-Histon H3-K4 (Q16695/P68431) Kaninchen monoklonaler Antikörper für ChIP-Seq, CUT&Tag, WB

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

Histone sind hochkonservierte basische Proteine, die als Kernkomponenten der Nukleosomen dienen, den grundlegenden Einheiten des Chromatins. Histon H3 ist eines der fünf Haupt-Histonproteine, die an der Struktur des Chromatins in eukaryotischen Zellen beteiligt sind. Zusammen mit H2A, H2B und H4 bildet es den Histonoktamer, um den herum etwa 147 Basenpaare der DNA gewickelt sind, wodurch das Genom verdichtet und die Zugänglichkeit für die transkriptionelle Maschinerie reguliert wird.

Die Dynamik der Nukleosomen, einschließlich posttranslationaler Modifikationen (PTMs) an Histonenden, spielt eine entscheidende Rolle bei der epigenetischen Regulation. Histon H3 unterliegt zahlreichen Modifikationen wie Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und mehr, die kollektiv den „Histone-Code“ bilden, der die Chromatinstruktur und die Genexpression steuern.

Unter diesen PTMs ist die Trimethylierung von Lysin 4 an Histon H3 (H3K4me3) ein Kennzeichen der aktiven Transkription. Sie kommt überwiegend an den Promotoren aktiv transkribierter Gene vor und ist an die Rekrutierung von Chromatin-Remodelling-Komplexen und Transkriptionsfaktoren beteiligt. Der hier beschriebene Antikörper erkennt spezifisch die trimethylierte Form von H3K4. Diese Modifikation wird durch Methyltransferasen wie MLL-Komplexe vermittelt und ist mit der Genaktivierung assoziiert. Verwandte Referenzen: PMID:16267050 PMID:16457588 PMID:17194708

Histon H3.1t (codiert durch das H3-4-Gen, Accession Q16695) ist eine testisspezifische Variante von Histon H3.1, die in testikulären Zellen exprimiert wird. Das kanonische Histon H3.1 (Accession P68431) wird in den meisten Geweben exprimiert und durch mehrere Gene codiert. Beide Varianten weisen eine hohe Sequenzähnlichkeit auf und sind Kernkomponenten des Nukleosoms.

Die subzelluläre Lokalisierung ist ausschließlich nukleär, assoziiert mit Chromosomen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das dem trimethylierten Lysin 4 von menschlichem Histon H3 entspricht. Für Anwendungen wie ChIP-seq, CUT&Tag oder IF sollten Sie eine Negativkontrolle unter Verwendung eines nicht-trimethylierten Peptids oder einer Isotypenkontrolle in Betracht ziehen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Der Antikörper wird aufgrund der hohen Konservierung des H3-N-Terminus über Arten hinweg eine breite Kreuzreaktivität vorhergesagt. Es wird jedoch empfohlen, eine Validierung im entsprechenden experimentellen System durchzuführen.
• Für Western Blots sollte eine Bande um 15 kDa, die Histon H3 entspricht, nachgewiesen werden. Stellen Sie eine ordnungsgemäße Extraktion der Histone sicher, insbesondere bei der Analyse von Methylierungszuständen.
• In ChIP-Assays sollten die optimale Scherung des Chromatins und die Antikörpertitration empirisch bestimmt werden.
• Für quantitative Anwendungen wie ELISA oder DB sollten Sie eine Standardkurve mit bekannten Mengen an trimethyliertem Peptid verwenden.
• Der Antikörper kann in multiplexen Assays zusammen mit anderen Histonmodifikations-Antikörpern verwendet werden, um den Histone-Code kombinatorisch zu untersuchen.

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