TriMethyl-Histon H3-K4 (Q16695 / P68431) Kaninchen-monoklonaler Antikörper für epigenetische Forschung & ChIP, WB, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

• Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin verpackt und verdichtet, um den Zugang für Transkriptions-, Reparatur- und Replikationsmaschinerie einzuschränken. Es spielt eine zentrale Rolle bei der Erhaltung der Chromosomenstabilität und der Regulation der Genexpression durch eine komplexe Vielfalt posttranslationaler Modifikationen (der "Histon-Code"). Verwandte Referenzen: PMID:17194708
• Das kanonische H3.1-Protein (kodiert durch mehrere HIST1H3-Gene, SWISS P68431) wird replikationsabhängig in den meisten Zelltypen exprimiert, während die testisspezifische Variante H3.1t (HIST3H3, SWISS Q16695) überwiegend in Hodenexprimiert wird. Beide lokalisieren zum Zellkern und assoziieren während der Zellteilung mit Chromosomen. Verwandte Referenzen: Gen/Protein-spezifisch; siehe UniProt Q16695/P68431
• Trimethylierung an Lysin 4 (H3K4me3) ist eine zentrale epigenetische Markierung, die mit aktiven Promotoren, offener Chromatin-Konformation und transkriptioneller Initiation verbunden ist. Sie wird durch Methyltransferasen der COMPASS-Familie eingebracht und von Leseproteinen erkannt, die die Genaktivierung fördern. Verwandte Referenzen: PMID:16185088
• H3K4me3 koexistiert und interagiert mit anderen Histonmodifikationen (z. B. Acetylierung, Phosphorylierung, Methylierung an anderen Resten), um Chromatinzustände fein einzustellen. Fehlregulation dieser Markierung wird mit Krebs, Entwicklungsstörungen und Immundysfunktion in Verbindung gebracht, was sie zu einem wichtigen Biomarker in der epigenetischen Forschung und der IVD-Entwicklung macht.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen (ein synthetisches trimethyliertes Peptid um K4) wurde entwickelt, um eine hohe Spezifität für die H3K4me3-Modifikation zu gewährleisten. Zur Bestätigung der Selektivität empfehlen sich Peptid-Konkurrenzassays oder die Behandlung mit Histon-Demethylasen (z. B. LSD1), die Methylgruppen entfernen.
• Für Western Blot (WB) werden Histon-Extraktionsprotokolle empfohlen, die basische Kernproteine anreichern. Die erwartete Bande liegt bei ~15 kDa; überprüfen Sie die Identität der Bande mit H3K4me3-positiven Kontrollen.
• Bei der Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) validieren Sie die Anreicherung an bekannten H3K4me3-Zielgenen (z. B. GAPDH-Promoter) per qPCR. Fügen Sie geeignete IgG-Kontrollen hinzu, um den Hintergrund zu bestimmen.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Antigen-Retrieval-Bedingungen (pH 6 Citrat oder pH 9 EDTA) die Färbung beeinflussen. Testen Sie einen Bereich von Verdünnungen auf positiven und negativen Geweben.
• Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung über Arten hinweg ist eine Kreuzreaktivität mit Mensch, Maus, Ratte und anderen Wirbeltieren zu erwarten. Validieren Sie die Detektion in Ihrem spezifischen Probenystem vor der quantitativen Analyse.

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