TriMethyl-Histon H3-K4 (H3K4me3) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper – Q16695/P68431 für ChIP-seq & WB

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernhistonprotein, das zusammen mit H2A, H2B und H4 das Nukleosom bildet, die fundamentale wiederkehrende Einheit des Chromatins. Nukleosomen verdichten die DNA und regulieren ihre Zugänglichkeit für zelluläre Maschinen, wobei sie eine zentrale Rolle bei der Transkription, Replikation, Reparatur und der chromosomalen Stabilität spielen. Posttranslationale Modifikationen von Histonen, die kollektiv als „Histone-Code“ bekannt sind, steuern die Chromatinstruktur und die Genexpression dynamisch. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695/P68431

Die Trimethylierung von Lysin 4 auf Histon H3 (H3K4me3) ist ein Kennzeichen aktiver Genpromotoren und eng mit dem transkriptionellen Start und der Elongation verknüpft. Diese Modifikation wird durch spezifische Methyltransferasen eingebracht und durch Demethylasen entfernt, wobei sie als kritischer epigenetischer Regulator in der Entwicklung, Differenzierung und Krankheit dient.

Histon H3 befindet sich im Zellkern und ist mit Chromosomen assoziiert. Es existieren mehrere Varianten, darunter das kanonische H3.1 (codiert durch mehrere Gene, repräsentiert durch P68431) und das testisspezifische H3.1t (Q16695). Während H3.1 ubiquitär exprimiert wird, findet man H3.1t vorwiegend in Hodenzellen. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695

Die N-terminalen Enden der Histone unterliegen einer Vielzahl von Modifikationen – Azetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und viele mehr – die eine komplexe regulatorische Landschaft erzeugen. Umfassende Kartierungsstudien haben diese Modifikationen katalogisiert und die komplexe kombinatorische Natur des Histone-Codes unterstrichen. Verwandte Referenzen: PMID:17194708

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB) und Dot Blot (DB) wird eine einzelne Bande von ca. 15 kDa erwartet. Histonreiche Lysate (z. B. sauer extrahierte HeLa-Kernproteine) werden als positive Kontrollen empfohlen, und die Beladung sollte am Gesamt-H3 normalisiert werden.
• Bei der Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) und ChIP-seq sollten die Vernetzungs- und Sonikationsbedingungen für den spezifischen Zelltyp optimiert werden. Fügen Sie bekannte H3K4me3-positive Loci (z. B. GAPDH-Promotor) und negative Kontrollregionen hinzu, um die Anreicherung zu validieren.
• Für die Immunhistochemie an Paraffin-schnitten (IHC-P) ist eine Antigen-Retrieval (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) unerlässlich. Es sollte ein vorwiegend nukleäres Färbemuster beobachtet werden, wobei die Signalintensität die transkriptionelle Aktivität des Gewebes widerspiegelt.
• Bei ELISA und anderen plattenbasierten Assays sollte die Verwendung eines trimethylierten H3K4-Peptids als positive Kontrolle und eines unmodifizierten oder monomethylierten Peptids in Betracht gezogen werden, um die Modifikationsspezifität zu bestätigen.
• Wie bei jedem polyklonalen Antikörper sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz durch Titrierung an bekannten positiven Proben überprüft werden. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Arten wird aufgrund der hohen Sequenzkonservierung bei Wirbeltieren vorhergesagt, aber eine Validierung im entsprechenden Probenystem wird empfohlen.

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