TriMethyl-Histon H3-K27 Kaninchen-monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, ChIP und CUT&Tag Anwendungen

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Core-Histon-Protein, das zusammen mit H2A, H2B und H4 das Nukleosom bildet – die grundlegende Wiederholungseinheit von Chromatin. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und steuern dadurch die Zugänglichkeit genetischer Information für die zellulären Maschinen, die für Transkription, Replikation und Reparatur verantwortlich sind. Diese zentrale Rolle macht Histone zu Schlüsselregulatoren der genomischen Stabilität und Genexpression.

Die funktionelle Vielfalt von Histonen wird weitgehend durch eine Vielzahl posttranslationaler Modifikationen (PTM) vermittelt, die gemeinsam als „Histon-Code“ bezeichnet werden. Diese Modifikationen – darunter Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und andere – treten an spezifischen Resten auf und steuern die Chromatin-Dynamik. Unter diesen ist die Tri-Methylierung von Histon H3 an Lysin 27 (H3K27me3) eine gut etablierte repressive Markierung, die mit der Bildung von fakultativem Heterochromatin und langfristiger Genstilllegung verbunden ist.

Dieser kaninchen-monoklonale Antikörper wurde gegen ein synthetisches trimethyliertes Peptid erzeugt, das K27 des menschlichen Histons H3 umfasst (basierend auf NP_003520.1). Er erkennt Histon H3 spezifisch nur, wenn es an K27 trimethyliert ist, und ermöglicht so den präzisen Nachweis dieser epigenetischen Markierung in verschiedenen Assays.

Verwandte Referenzen: PMID:16267050, PMID:17194708

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches trimethyliertes Peptid um K27; daher wird erwartet, dass dieser Antikörper eine hohe Spezifität für den trimethylierten Zustand aufweist. Erwägen Sie eine Spezifitätsüberprüfung per Dot-Blot oder Peptid-Konkurrenz-Assays unter Verwendung von unmodifizierten, mono-, di- und trimethylierten Peptiden.
• Für Western Blot (WB) werden histonreiche Kernextrakte oder säureextrahierte Histone empfohlen. Die vorausgesagte Bande beträgt ~15 kDa. Verwenden Sie geeignete Ladekontrollen (z. B. Gesamt-H3 oder Histon-H3-C-terminaler Antikörper) zur Normalisierung der Proteinbeladung.
• Bei der Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) kann dieser Antikörper zur Anreicherung von Chromatinregionen verwendet werden, die durch H3K27me3 markiert sind. Optimieren Sie die Chromatin-Scherung und Antikörperkonzentration für jeden Zelltyp. Fügen Sie positive (z. B. HOX-Gen-Loci) und negative (z. B. Haushaltsgen-Promotoren) Kontrollregionen in die qPCR-Analyse ein.
• Für CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation) kann der Antikörper als Primärantikörper für Targeting und in-situ-Spaltung dienen. Befolgen Sie das Herstellerprotokoll für perlbasierte oder direkte Bindungsansätze. Eine genomweite Analyse kann die Verteilung von H3K27me3 über das Genom aufzeigen.
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) wird eine Kernfärbung erwartet. Optimieren Sie die Fixierung (z. B. 4 % PFA für IF, formalinfixierte paraffineingebettete Schnitte für IHC) und Permeabilisierungsbedingungen. Eine Blockierung mit Serum/BSA kann den Hintergrund minimieren.
• Validieren Sie den Antikörper immer im relevanten Proben system und Anwendungskontext. Titrieren Sie den Antikörper und fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten.

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