TriMethyl-Histon H3-K27 Kaninchen monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für ChIP, CUT&Tag, WB

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TriMethyl-Histon H3 (K27) Funktion und Lokalisation

Histon H3 ist ein Kernhistonprotein, das zusammen mit H2A, H2B und H4 das Nukleosom bildet, die grundlegende sich wiederholende Einheit des Chromatins. Als Kernkomponente des Nukleosoms umwickelt Histon H3 die DNA, kondensiert sie zu Chromatin und reguliert den Zugang zur zugrundeliegenden genetischen Information. Diese strukturelle Rolle ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der Chromosomenstabilität und die Kontrolle wichtiger Kernprozesse wie Transkription, DNA-Replikation und DNA-Reparatur.

Histon H3 unterliegt einer Vielzahl posttranslationaler Modifikationen (PTMs) an seinem flexiblen N-terminalen Ende, einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und Citrullinierung. Diese Modifikationen, oft als "Histon-Code" bezeichnet, regulieren die Chromatinstruktur und -funktion dynamisch. Die spezifische Trimethylierung von Lysin 27 (H3K27me3) ist eine gut charakterisierte repressive Markierung, die durch den Polycomb-Repressor-Komplex 2 (PRC2) eingebracht wird und mit Gen-Stilllegung, X-Chromosom-Inaktivierung und Entwicklungsregulation assoziiert ist.

Die H3.1-Variante (UniProt P68431) ist weit verbreitet exprimiert und macht den Großteil von Histon H3 in somatischen Zellen aus, während H3.1t (H3-4, UniProt Q16695) hauptsächlich in Hodenzellen exprimiert wird. Beide Varianten lokalisieren im Zellkern und an Chromosomen, wo sie an der Nukleosomenassemblierung und Chromatinorganisation teilnehmen.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Immunogen-Information: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches trimethyliertes Peptid erzeugt, das Lysin 27 (K27) von humanem Histon H3 umspannt. Dieses Design gewährleistet die spezifische Erkennung der H3K27me3-Modifikation. Für Anwendungen, die eine Unterscheidung zwischen verschiedenen Methylierungszuständen erfordern, validieren Sie die Spezifität mithilfe von Peptid-Kompetitions-Assays.
• Western Blot (WB): Das vorhergesagte Molekulargewicht von Histon H3 beträgt etwa 15 kDa. Verwenden Sie geeignete Gel-Prozentsätze (z.B. 15% SDS-PAGE) für eine optimale Trennung. Schließen Sie positive und negative Kontrollen ein (z.B. mit EZH2-Inhibitoren behandelte Zellen, um H3K27me3 zu reduzieren), um die Bandenspezifität zu bestätigen.
• ChIP und CUT&Tag: Dieser Antikörper ist geeignet für Chromatin-Immunpräzipitation und CUT&Tag-Assays, um die H3K27me3-Verteilung genomweit oder an spezifischen Loci zu kartieren. Optimieren Sie die Antikörperkonzentration für jede Chromatin-Eingangsmenge und schließen Sie geeignete IgG-Kontrollen ein.
• ELISA: Verwenden Sie das immunisierende Peptid als positive Kontrolle, um Standardkurven zu erstellen. Bedenken Sie, dass der Antikörper mit Peptiden, die ähnliche trimethylierte Motive enthalten, kreuzreagieren kann; validieren Sie dies im relevanten Proben-System.

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