TriMethyl-Histon H3-K27 Maus monoklonaler Antikörper (P68431) für ChIP, CUT&Tag, WB und IHC

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3.1 Funktion und Lokalisierung

• Histon H3.1 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der grundlegenden sich wiederholenden Einheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und regulieren den Zugang zur genetischen Information.
• Als Schlüssel-Histon spielt H3 eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Die DNA-Zugänglichkeit wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs) kontrolliert, die kollektiv als 'Histon-Code' bezeichnet werden und auch Nukleosomen-Remodelling umfassen.
• Der N-terminale Schwanz von Histon H3 ist einer Vielzahl von PTMs unterworfen, einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und anderen. Diese Markierungen sind dynamisch und orchestrieren verschiedene Chromatin-vermittelte Prozesse.
• Die Trimethylierung von Lysin 27 (H3K27me3) ist eine gut charakterisierte repressive Markierung, die mit Gen-Stilllegung und Heterochromatin-Bildung assoziiert ist und hauptsächlich durch den Polycomb-repressiven Komplex 2 (PRC2) eingebracht wird.
• Subzellulär ist Histon H3.1 im Zellkern lokalisiert und mit Chromosomen assoziiert.

Verwandte Referenzen: UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches trimethyliertes Peptid, das Reste um K27 umspannt, hergestellt. Es wird erwartet, dass er spezifisch die trimethylierte Form von Histon H3 an Lysin 27 erkennt und möglicherweise nicht mit unmodifizierten oder anderen methylierten Zuständen kreuzreagiert. Ziehen Sie in Betracht, die Spezifität mit Peptid-Kompetitions-Assays oder geeigneten Positiv-/Negativkontrollen zu validieren.
• Für die Western-Blot-Analyse verbessert die Extraktion von Histonen über Säureextraktionsprotokolle oft das Signal und reduziert den Hintergrund. Verwenden Sie eine Ladekontrolle wie Gesamt-Histon H3 oder Histon H4.
• Für die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) und CUT&Tag optimieren Sie die Antikörperkonzentration und die Vernetzungsbedingungen. Die hohe Spezifität für H3K27me3 macht ihn geeignet, diese repressive Markierung genomweit zu kartieren.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigen-Retrieval (z.B. hitzeinduzierte Epitop-Freilegung) erforderlich sein, um das Epitop freizulegen. Validieren Sie das Färbemuster im relevanten Gewebe und Zelltyp.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sorgfältig gewählt werden, um die Chromatin-Architektur und die Epitop-Zugänglichkeit zu erhalten.
• Während dieser Antikörper für mehrere Anwendungen geliefert wird, testen Sie immer Verdünnungen und Bedingungen in Ihrem spezifischen experimentellen System in einem Pilotversuch, um eine optimale Leistung sicherzustellen.

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