TriMethyl-Histon H3-K14 (Q16695 / P68431) Kaninchen polyklonaler Antikörper für WB, IF, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, der grundlegenden Einheit des Chromatins. Zusammen mit H2A, H2B und H4 bildet es den oktameren Histonkern, um den DNA gewickelt ist, wodurch das Genom komprimiert und die Zugänglichkeit der DNA reguliert wird. Diese strukturelle Rolle ist zentral für Prozesse wie Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomale Stabilität. Die Funktion von Histon H3 wird dynamisch durch eine komplexe Vielfalt posttranslationaler Modifikationen (PTM) gesteuert, darunter Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und andere, die gemeinsam als „Histon-Code“ bezeichnet werden. Diese Modifikationen verändern die Chromatinstruktur und dienen als Bindungsplattformen für Effektorproteine.

Histon H3 lokalisiert sich primär im Zellkern und ist entlang der Chromosomen verteilt. Es gibt verschiedene H3-Varianten: die kanonischen Varianten H3.1 und H3.2, die replikationsunabhängige Variante H3.3 sowie die testisspezifische Variante H3.1t (kodiert durch H3-4/HIST3H3). Laut UniProt wird die H3.1t-Variante (Q16695) spezifisch in Hodenzellen exprimiert, während die Hauptvariante H3.1 (P68431) ubiquitär vorkommt. Beide Isoformen teilen einen hohen Grad an Sequenzidentität und unterliegen ähnlichen PTMs.

Der K14-Rest von Histon H3 ist eine bekannte Stelle für mehrere PTMs, darunter Acetylierung (H3K14ac) und Methylierung. Die Trimethylierung von H3K14 (H3K14me3) ist eine kürzlich erkannte Modifikation, die eine Rolle bei der Chromatinregulation und Genexpression spielen kann. Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das den N-terminalen Schwanz (aa1-100) umfasst – die Region, die aus dem Nukleosom herausragt und am stärksten modifiziert ist. Es wird erwartet, dass er spezifisch die trimethylierte Form von K14 erkennt.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695 UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht dem N-terminalen Schwanz (Aa 1-100) von menschlichem Histon H3. Diese Region ist hoch konserviert, was die breite vorausgesagte Kreuzreaktivität erklärt. Da dieser Antikörper jedoch auf eine spezifische PTM (Trimethyl K14) abzielt, wird eine Validierung im gewünschten Zell- oder Gewebesystem empfohlen, um Reaktivität und Spezifität zu bestätigen.
• Bei Western Blotting sind Histone stark an nukleäre DNA gebunden; daher können Säureextraktions- oder Histonanreicherungsprotokolle die Detektion verbessern. Verwenden Sie geeignete Beladungskontrollen (z. B. Gesamt-H3 oder H4), um Beladungsunterschiede zu normalisieren.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC ist eine Fixierung mit Paraformaldehyd gefolgt von Permeabilisierung mit Triton X-100 typischerweise wirksam für nukleäre Zielstrukturen. Allerdings kann das Epitop empfindlich auf übermäßige Fixierung reagieren; optimieren Sie daher Fixierzeit und Detergenskonzentration.
• Da PTM-spezifische Antikörper eine gewisse Kreuzreaktivität mit anderen Modifikationen aufweisen können, erwägen Sie die Verwendung von Peptidkonkurrenzassays (z. B. Vorkultivierung des Antikörpers mit Trimethyl K14-Peptid gegenüber unmodifizierten oder Mono/Di-Methyl-Peptiden), um die Spezifität unter Ihren experimentellen Bedingungen zu überprüfen.
• ELISA ist als Anwendung aufgeführt; für die Beschichtung können Histonpeptide oder gereinigte Nukleosomen verwendet werden. Stellen Sie sicher, dass die Beschichtung das K14me3-Epitop ausreichend abdeckt.

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