TGF beta 1 Kaninchen-polykolonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P01137

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TGF beta 1

• TGF-beta-1 ist ein Mitglied der Familie der transformierenden Wachstumsfaktoren beta und wird als 44-kDa-Proteinvorstufe synthetisiert, die einer proteolytischen Spaltung unterliegt, durch die der latente LAP-TGF-beta-1-Komplex entsteht (PubMed:29109152). Zugehörige Referenzen: PMID:29109152
• Die Aktivierung von TGF-beta-1, das in einem latenten Zustand in der extrazellulären Matrix erhalten bleibt, wird durch die Integrin-vermittelte Freisetzung und die Interaktion mit Umgebungsmolekülen wie LRRC32/GARP, LRRC33/NRROS und LTBP1 streng kontrolliert (PubMed:19651619, PubMed:19750484, PubMed:2022183, PubMed:22278742, PubMed:28117447). Zugehörige Referenzen: PMID:19651619, PMID:19750484, PMID:2022183, PMID:22278742, PMID:28117447
• Nach der Aktivierung signalisiert TGF-beta-1 über TGFBR1/TGFBR2, um SMAD2/3 zu phosphorylieren, was zur Translokation in den Zellkern und zur transkriptionellen Regulation von Genen führt, die an EMT und Zellmigration beteiligt sind (PubMed:20207738, PubMed:25893292, PubMed:29483653, PubMed:30696809). Zugehörige Referenzen: PMID:20207738, PMID:25893292, PMID:29483653, PMID:30696809
• TGF-beta-1 spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des Immunhaushalts, indem es die Differenzierung von CD4+-T-Zellen steuert: Hohe Konzentrationen fördern die Entwicklung von Treg-Zellen, während niedrige Konzentrationen zusammen mit IL-6 und IL-21 die Th17-Polarisierung begünstigen.
• In Knochen und Knorpel stimuliert TGF-beta-1 die Aktivität von Osteoblasten und die Kollagenproduktion und trägt dadurch zum Knochenumbau und zur Pathologie der Osteoarthrose bei (PubMed:25310401, PubMed:11746498, PubMed:17827158). Zugehörige Referenzen: PMID:25310401, PMID:11746498, PMID:17827158
• Das Protein wird in den extrazellulären Raum und die extrazelluläre Matrix sezerniert; es enthält Disulfidbrücken, N-verknüpfte Glykosylierung und eine dibasische Spaltungsstelle, die für die Aktivierung erforderlich ist.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen (AS 30-280) umfasst die LAP-Domäne, die bei humanem, murinem und Ratten-TGF-beta-1 hoch konserviert ist, was die angegebene Kreuzreaktivität unterstützt. Bestätigen Sie die Reaktivität in Ihrer Zielart, wenn Sie andere Modelle verwenden.
• Beim Western Blot (WB) ist unter reduzierenden Bedingungen TGF-beta-1 als Vorläuferprotein bei etwa 44 kDa zu erwarten; abhängig von der Probenvorbereitung und dem Aktivierungsstatus kann auch die reife Form mit etwa 12,5 kDa nachgewiesen werden. Validieren Sie die Ergebnisse mit geeigneten Positivkontrollen.
• Optimieren Sie bei IHC-P die Antigenretrieval-Bedingungen, beispielsweise mit Citratpuffer bei pH 6,0, und verwenden Sie ein biotinfreies Detektionssystem, um den Hintergrund zu minimieren. Validieren Sie die Färbung mit Isotypkontrollen.
• Für IF/ICC permeabilisieren Sie die Zellen, beispielsweise mit 0,1 % Triton X-100, und schließen Sie eine Kontrolle ohne Primärantikörper ein, um die Spezifität zu beurteilen.
• ELISA-Anwendungen erfordern möglicherweise die Kombination mit einem Capture-Antikörper; berücksichtigen Sie bei der Entwicklung von Sandwich-Assays die polykolonale Natur des Antikörpers.

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