Symmetric DiMethyl-Histone H4-R3 (P62805) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H4-Funktion und Lokalisierung

• Histon H4 ist eines der Kernhistone, die das Nukleosom bilden, die grundlegende Einheit des Chromatins. Zusammen mit den Histonen H2A, H2B und H3 umwickelt ein Histonoktamer ~147 bp DNA, verdichtet sie und reguliert den Zugang zum genetischen Material.
• Diese Verpackung ist für DNA-templatierte Prozesse einschließlich Transkription, Replikation, Reparatur und Aufrechterhaltung der chromosomalen Stabilität unerlässlich. Die dynamische Regulation der Chromatinstruktur wird durch posttranslationale Modifikationen (PTMs) an Histonen gesteuert, oft als "Histon-Code" bezeichnet.
• Histon H4 befindet sich hauptsächlich im Zellkern und ist mit Chromosomen assoziiert. Es kann im Zellkern lokalisiert sein, wenn spezifische Modifikationen auftreten, z. B. Acetylierung während der Spermatogenese.
• H4 unterliegt einer Vielzahl von PTMs, darunter Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und verschiedene Acylierungen. Diese Modifikationen treten an mehreren Resten auf und regulieren unterschiedliche nachgeschaltete Ereignisse.
• Die symmetrische Dimethylierung von Arginin 3 (H4R3me2s) wird durch die Protein-Arginin-Methyltransferasen PRMT5 und PRMT7 katalysiert. Diese Modifikation ist an der Transkriptionsregulation beteiligt und ist eine der vielen Markierungen, die den Histon-Code ausmachen. Verwandte Referenzen: UniProt P62805.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid hergestellt, das die Aminosäuren 1-100 von humanem Histon H4 (NP_003529.1) umspannt, mit symmetrischer Dimethylierung an Arg3. Das Immunogen-Design deutet auf Spezifität für die modifizierte Form hin, aber Kreuzreaktivität mit unmodifizierten oder anderen modifizierten Formen sollte bewertet werden.
• Für Western Blotting (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von Histon H4 ~11 kDa. Ziehen Sie die Verwendung von Kernextrakten oder histonangereicherten Präparationen als positive Kontrollen in Betracht. Reduzieren und denaturieren Sie Proben vor dem Laden.
• Bei der Immunhistochemie (IHC) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) kann eine Antigen-Retrieval erforderlich sein, um das Epitop freizulegen, insbesondere in formalinfixierten, paraffineingebetteten Geweben. Testen Sie mehrere Antigen-Retrieval-Methoden.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität durch Einbeziehung geeigneter Kontrollen, wie z. B. Peptidkompetitionsassays oder Vergleich mit Zellen, die mit Methyltransferase-Inhibitoren behandelt wurden.
• Der Antikörper wird aufgrund der hohen Sequenzkonservierung von Histon H4 voraussichtlich mit einem breiten Spektrum von Spezies reagieren; überprüfen Sie jedoch die Reaktivität in Ihrem spezifischen Modellsystem.
• Optimieren Sie die Verdünnungsfaktoren empirisch für jede Anwendung; typische Startverdünnungen können aus bestehenden Protokollen für polyklonale Antikörper gegen Histonmodifikationen übernommen werden.

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