Symmetrisches DiMethyl-Histon H3-R8 Kaninchen pAb (Q16695/P68431) für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP-seq

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3.1t / Histon H3.1 Funktion und Lokalisierung

Histon-H3-Varianten (einschließlich H3.1t, kodiert durch H3-4/HIST3H3, und H3.1, kodiert durch multiple Gencluster wie H3C1-H3C12) sind Kernkomponenten des Nukleosoms. Nukleosomen wickeln und verdichten DNA zu Chromatin, begrenzen die Zugänglichkeit der DNA und spielen eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität.

Verwandte Referenzen: UniProt P68431

• Diese Histone unterliegen einem komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs), die kollektiv als „Histone-Code“ bezeichnet werden und die Chromatindynamik und Genexpression regulieren. Darunter wird die symmetrische Dimethylierung von Arginin an Position 8 (R8) im reifen Histon H3 (entspricht Arg9 in der UniProt-Sequenz) durch Protein-Arginin-Methyltransferase 5 (PRMT5) katalysiert. Diese Modifikation ist mit transkriptioneller Repression und Heterochromatinbildung assoziiert.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695

• Histon H3.1t (UniProt Q16695) ist eine testisspezifische Variante, die primär in testikulären Zellen exprimiert wird, während H3.1 (UniProt P68431) die kanonischen somatischen Formen darstellt.
• Subzelluläre Lokalisierung: Beide Varianten sind im Zellkern und auf den Chromosomen lokalisiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Western Blot (WB): Erwarten Sie eine Bande bei ca. 15 kDa. Verwenden Sie geeignete positive und negative Kontrollen (z. B. unbehandelte vs. mit PRMT5-Inhibitor behandelte Zellen), um die Spezifität der symmetrischen Peptid-Wettbewerbsassays, um die Antikörperbindung an das R8me2s-Epitop zu validieren.
• Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC): Optimieren Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte, da die Epitop-Zugänglichkeit variieren kann. Da Histon H3 nukleär ist, stellen Sie sicher, dass ein nukleäres Färbemuster vorliegt, und vergleichen Sie es mit der Färbung für Gesamt-Histon H3 oder DAPI-Gegenfärbung.
• ELISA: Dieser Antikörper kann für direktes oder indirektes ELISA verwendet werden, um symmetrische Dimethylierungsniveaus zu quantifizieren. Titrieren Sie die Antikörperkonzentration und verwenden Sie geeignete Blockierungsmittel.
• ChIP-seq: Aufgrund der hohen Häufigkeit von Histon H3 sollten Sie die Vernetzung und Chromatin-Scherung optimieren. Verwenden Sie minimales Input-Material und validieren Sie die ChIP-Effizienz mit positiven und negativen genomischen Loci (z. B. heterochromatische vs. euchromatische Regionen).
• Allgemeiner Tipp: Fügen Sie immer eine Kontrolle mit nicht-modifiziertem Peptid hinzu, um modifikationsspezifische Signale zu unterscheiden.

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