Smad5 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - Q99717

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Smad5-Funktion und Lokalisierung

• SMAD5 (Mothers against decapentaplegic homolog 5), auch bekannt als JV5-1 oder MADH5, ist ein Mitglied der SMAD-Familie von Transkriptionsfaktoren, die Signale von Liganden der TGF‑β-Superfamilie übertragen.
• Nach Stimulation durch knochenmorphogenetische Proteine (BMP) wird SMAD5 durch BMP-Rezeptoren vom Typ I phosphoryliert, was seine Assoziation mit SMAD4 auslöst. Der resultierende Komplex transloziert in den Kern und bindet an Smad-Bindungselemente (SBEs), um die Genexpression zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:9442019 PMID:33510867
• SMAD5 ist essentiell für die embryonale Entwicklung, Zelldifferenzierung, Angiogenese und Gewebehomöostase. Verwandte Referenzen: PMID:12064918 PMID:16516194
• In seinem nicht-phosphorylierten Zustand übt SMAD5 eine zytoplasmatische Funktion im Energiestoffwechsel aus, indem es die mitochondriale Atmung und Glykolyse durch eine Interaktion mit Hexokinase 1 (HK1) verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:28675158
• Studien zur subzellulären Lokalisierung zeigen SMAD5 im Zytoplasma, Kern und Mitochondrium, was seine vielfältigen Signal- und Stoffwechselfunktionen widerspiegelt.
• SMAD5 ist ubiquitär in menschlichen Geweben exprimiert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung und Acetylierung; es enthält auch eine Zink-bindende Domäne, die für SMAD-Proteine charakteristisch ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen war ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 200–300 von menschlichem SMAD5 entspricht. Der resultierende monoklonale Kaninchen-Antikörper wird erwartet, das gesamte SMAD5-Protein zu erkennen; er kann möglicherweise nicht zwischen phosphorylierten und unphosphorylierten Formen unterscheiden, es sei denn, das Phospho-Epitop liegt innerhalb dieses Bereichs.
• Für den Western Blot wird eine Bande bei ca. 52 kDa erwartet. Erwägen Sie die Behandlung von Zellen mit BMP-Liganden (z. B. BMP2/BMP4), um Verschiebungen des phosphorylierten SMAD5 zu visualisieren oder die Aktivierung des Signalwegs zu verifizieren.
• Dieser Antikörper eignet sich für die Immunpräzipitation von endogenem SMAD5 aus menschlichen und murinen Lysaten; wir empfehlen die Optimierung von Lyse- und Waschbedingungen für Co-Immunpräzipitationsstudien.
• Im ELISA kann der Antikörper zum Nachweis von SMAD5 in peptidbasierten oder Sandwich-ELISA-Formaten verwendet werden. Validieren Sie mit rekombinantem SMAD5-Protein oder Zelllysaten.
• Wie bei jedem Antikörper sollten Sie die Spezifität in Ihrem experimentellen System unter Verwendung geeigneter positiver (z. B. BMP-behandelte HeLa, HEK293) und negativer (z. B. siRNA-vermittelte Knockdown) Kontrollen validieren.

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