SARS-CoV-2 Spike S1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von SARS-CoV-2 Spike S1

• Das Spike-Glykoprotein (S) vermittelt den Eintritt des Virus, indem es an den Rezeptor für das Angiotensin-konvertierende Enzym 2 (ACE2) des Wirts bindet, ein entscheidender Schritt zur Einleitung der Infektion. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Alternative Rezeptoren wie Neuropilin-1 (NRP1)/NRP2, Asialoglykoprotein-Rezeptor 1 (ASGR1) und Integrine können ebenfalls den Viruseintritt erleichtern, was zum Tropismus für Riechepithelzellen beitragen kann, die niedrige ACE2-Spiegel aufweisen. Verwandte Referenzen: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• Das S-Protein wird von Wirtsproteasen in die S1- (Rezeptorbindung) und S2- (Membranfusion) Untereinheiten gespalten; die Spaltung an der S2'-Stelle durch TMPRSS2 oder Cathepsin L ist für die Aktivierung der Fusion unerlässlich. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Nach der Spaltung durchläuft die S2-Untereinheit eine dramatische konformationelle Umordnung von einem Prä-Fusions-Zustand zu einem postfusionalen trimeren Haarnadel, wodurch die viralen und zellulären Membranen in enge Nähe zur Fusion gebracht werden.
• Subzellulär lokalisiert das Spike-Protein an der Virionmembran, der Membran des intermediären Kompartiments zwischen endoplasmatischem Retikulum und Golgi-Apparat (ERGIC) des Wirts und der Wirtszellmembran, was seinen Transport- und Knospungszyklus widerspiegelt.
• Das S-Protein besitzt superantigenähnliche Eigenschaften und beteiligt sich an der viralen Immunabwehr, indem es die angeborenen Immunantworten des Wirts hemmt und Restriktionsfaktoren wie Tetherin entgegenwirkt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid hergestellt, das die Aminosäuren 200–300 innerhalb der S1-Untereinheit (YP_009724390.1) überspannt, eine Region, die die Rezeptorbindedomäne überlappt. Dieses Epitop ist in vielen SARS-CoV-2-Isolaten konserviert, was auf eine breite Reaktivität hindeutet.
• Für Western Blot (WB) hat das Spike-Protein in voller Länge ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~141 kDa; jedoch kann je nach Probenvorbereitung der Nachweis von S1-Spaltprodukten (ca. 80 kDa) erfolgen. Validieren Sie unter Verwendung von Lysaten aus SARS-CoV-2-infizierten Zellen oder rekombinantem S1-Protein.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Permeabilisierungsprotokolle in Betracht gezogen werden, um intrazelluläres Spike-Protein in infizierten Zellen nachzuweisen. Eine Co-Färbung mit Organellmarkern kann bei der Untersuchung der subzellulären Lokalisierung hilfreich sein.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz für rekombinantes S1-Protein oder zur Quantifizierung von Viruspartikeln verwendet werden. Titer und Kreuzreaktivität sollten gegen relevante SARS-CoV-2-Varianten bestätigt werden.
• Wie bei allen Forschungsantikörpern sollten die optimalen Arbeitsverdünnungen empirisch für jeden Assay und Probentyp bestimmt werden.

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