SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y) Kaninchen-mAk für WB, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y)

• Das SARS-CoV-2-Spike-Glykoprotein (S) ist ein trimeres Klasse-I-Fusionsprotein, das die virale Anheftung und den Eintritt in Wirtszellen durch Interaktion mit dem Angiotensin-converting-Enzym-2 (ACE2)-Rezeptor vermittelt. Verwandte Referenzen: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Es wird als Vorläuferprotein synthetisiert und in die S1- und S2-Untereinheiten gespalten; die S1-Untereinheit enthält die Rezeptorbindungsdomäne (RBD), die an ACE2 bindet, während die S2-Untereinheit die Membranfusion vermittelt.
• Die Spaltung der S2-Untereinheit an der S2’-Stelle durch Wirtsproteasen TMPRSS2 (an der Zelloberfläche) oder Cathepsin L (in Endosomen) legt das Fusionspeptid frei und löst irreversible Konformationsänderungen aus, die für den virale Eintritt erforderlich sind. Verwandte Referenzen: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Das Spike-Protein kann alternative Eintrittsrezeptoren nutzen, darunter Neuropilin-1 (NRP1) und NRP2, Integrine und den Asialoglykoprotein-Rezeptor 1 (ASGR1), was potenziell die Gewebstropismus beeinflusst. Verwandte Referenzen: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Strukturell enthält die Stieldomäne des S-Proteins drei Scharniere, die der Kopfdomäne eine beträchtliche Orientierungsfreiheit verleihen, ein Merkmal, das für die Rezeptorbindung wichtig ist. Verwandte Referenzen: PMID:32817270
• Es ist stark glykosyliert und enthält mehrere Disulfidbindungen; eine Palmitoylierungsstelle ist im cytoplasmatischen Schwanz vorhanden. Das Spike-Protein befindet sich auf der Virionmembran, der Membran des ER-Golgi-Zwischenkompartiments des Wirts und der Wirtszellmembran.
• Schlüsselwörter umfassen auch: virale Immun evasion, Hemmung der angeborenen Immunantwort des Wirts und Superantigen-Aktivität, was auf Rollen über den Zelleintritt hinaus hinweist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid generiert, das die Aminosäuren 450–550 des SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y-Mutant) überspannt, und erkennt daher wahrscheinlich ein Epitop innerhalb dieses Bereichs; bestätigen Sie die Spezifität gegenüber dem Wildtyp und anderen Varianten, wenn Kreuzreaktivitätsdaten benötigt werden.
• Für Western Blotting (WB) verwenden Sie reduzierende Bedingungen und erwägen Sie eine Entglykosylierung, um die Detektion des ~141 kDa全长-Spike-Proteins zu verbessern; validieren Sie mit rekombinantem RBD oder Spike-Trimer als Positivkontrolle.
• In ELISA-Anwendungen kann dieser monoklonale Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz dienen; die Beschichtungskonzentration und Blockierungsbedingungen sollten in der relevanten Probenmatrix optimiert werden.
• Aufgrund der kritischen Rolle der RBD bei der Anheftung an Wirtszellen kann dieser Antikörper für Neutralisierungsstudien oder kompetitive Bindungsassays nützlich sein, aber solche Verwendungen erfordern eine unabhängige funktionelle Validierung.

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