RELA Kaninchen pAb - Q04207

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RELA/p65-Funktion und -Lokalisierung

• RELA/p65 ist eine Untereinheit des NF-kappa-B-Transkriptionsfaktor-Komplexes, ein pleiotroper Regulator, der in fast allen Zelltypen vorkommt und eine zentrale Rolle bei Entzündung, Immunität, Differenzierung, Zellwachstum, Tumorentstehung und Apoptose spielt.
• NF-kappa-B-Komplexe sind Homo- oder Heterodimere, die aus RELA, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL und NFKB2/p52 gebildet werden; der RELA-NFKB1-Heterodimer ist die häufigste Form und fungiert als transkriptioneller Aktivator durch Bindung an Kappa-B-Stellen in den Promotoren der Zielgene.
• RELA kann die Zugänglichkeit des Promotors für Transkriptionsfaktoren modulieren und die Genexpression indirekt regulieren, was zu seinem breiten regulatorischen Potenzial beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:29813070
• In unstimulierten Zellen werden NF-kappa-B-Dimere im Zytoplasma durch Inhibitor-I-kappa-B-Proteine sequestriert; nach Aktivierung wird I-kappa-B phosphoryliert und abgebaut, wodurch RELA freigesetzt wird, um in den Kern zu translozieren.
• RELA unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung und Phosphorylierung, die seine transkriptionelle Aktivität, DNA-Bindungsaffinität und Wechselwirkungen mit Kofaktoren feinabstimmen.
• Auf Proteinebene wird RELA im Myokard exprimiert, was auf gewebsspezifische Rollen über seine ubiquitären Signalfunktionen hinaus hindeutet.
• Die subzelluläre Lokalisierung von RELA wird dynamisch reguliert und wechselt je nach Aktivierungszustand des NF-kappa-B-Weges zwischen Zytoplasma und Kern.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 400–500 am C-Terminus von Maus-RELA und gewährleistet die Erkennung des全长-Proteins über Arten mit hoher Homologie hinweg. Berücksichtigen Sie eine Sequenzausrichtung, wenn die Nutzung auf andere Organismen ausgeweitet wird.
• Für Western Blot wird eine Bande bei ca. 60 kDa erwartet; fügen Sie geeignete positive Kontrollen ein (z. B. stimulierte HeLa- oder RAW 264.7-Zellen) und überprüfen Sie die Spezifität mittels Knockdown- oder Knockout-Lysaten, falls verfügbar.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC ist die RELA-Lokalisierung in ruhenden Zellen typischerweise zytoplasmatisch und nach NF-kappa-B-Aktivierung nukleär; optimieren Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, um dieses Signal zu erhalten, und verwenden Sie geeignete Stimuli (z. B. TNF-alpha), um den Kerntransport zu validieren.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Kombination mit einem validierten Fang-Antikörper die Assay-Empfindlichkeit verbessern. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimalen Arbeitskonzentrationen in Ihrer spezifischen Probenmatrix zu bestimmen.

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