Ratten-Anti-Maus CD45R/B220 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P06800 / P08575

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD45R/B220-Funktion und -Lokalisierung

• Rezeptor-Tyrosin-Proteinphosphatase C (PTPRC), allgemein bekannt als CD45, L-CA, Ly-5 oder T200, ist ein transmembranes Glykoprotein. Die B220-Isoform wird spezifisch auf B-Zellen exprimiert und entspricht der hochmolekularen Variante von CD45.
• CD45 ist für die T-Zell-Aktivierung über den T-Zell-Rezeptor (TCR) essentiell und wirkt als positiver Regulator der T-Zell-Koaktivierung nach Bindung an DPP4. Die erste Phosphatasedomäne trägt die enzymatische Aktivität, während die zweite Domäne die Substratspezifität beeinflusst.
• Bei T-Zell-Aktivierung rekrutiert und dephosphoryliert CD45 SKAP1 und FYN und dephosphoryliert auch LYN, wodurch deren Kinaseaktivitäten moduliert werden.
• An der immunologischen Synapse interagiert CD45 mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen; diese Interaktion erkennt Tn-Antigen-tragendes CD45 auf Effektor-T-Zellen und trägt zur Modulation der T-Zell-Aktivierungsschwellen bei, was hilft, Autoreaktivität zu verhindern.
• CD45 ist an der Zellmembran, in Membranrafts und an der immunologischen Synapse lokalisiert, was mit seiner Rolle in der Signaltransduktion während des Zell-Zell-Kontakts übereinstimmt.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere CD45-Isoformen (z.B. CD45R, CD45RO, B220), die unterschiedlich in Leukozyten-Subpopulationen exprimiert werden und die Signalgebungsergebnisse beeinflussen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen umfangreiche N- und O-verknüpfte Glykosylierung und Phosphorylierung, die die Phosphataseaktivität und Oberflächenexpression regulieren.
• Das Maus-CD45 wird durch das Ptprc (Ly-5) Gen kodiert. Der hier beschriebene Antikörper kreuzreagiert mit Maus CD45R/B220.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper ist an konjugiert, einen durch Violettlaser anregbaren Fluorophor. Stellen Sie sicher, dass Ihr Durchflusszytometer mit einem 405 nm Laser und geeigneten Emissionsfiltern (z.B. 450/50 Bandpass) für eine optimale Detektion ausgestattet ist.
• Laut Anbieter kreuzreagiert der Antikörper mit Maus CD45R/B220. Wenn Sie mit Proben von Menschen oder anderen Spezies arbeiten, führen Sie vor der Verwendung geeignete Kreuzreaktivitätstests durch.
• CD45R/B220 wird hauptsächlich auf B-Zellen exprimiert; schließen Sie gut charakterisierte positive (z.B. Splenozyten oder B-Zelllinien) und negative (z.B. T-Zellen) Färbekontrollen ein, um die Spezifität in Durchflusszytometrie-Panels zu bestätigen.
• Das zur Erzeugung verwendete Immunogen umfasst ein Peptid aus Maus-/Human-CD45R/B220; daher könnte der Antikörper theoretisch humanes CD45R/B220 erkennen. Eine Validierung in der relevanten Spezies und im Probensystem wird empfohlen.
• Proteingewichte von 130–144 kDa repräsentieren verschiedene CD45-Isoformen. Für Anwendungen jenseits der Durchflusszytometrie (z.B. Western Blot) stellen Sie geeignete Molekulargewichtsmarker sicher und bedenken Sie, dass dieses Produkt nur für FC validiert ist.
• Lagern und handhaben Sie den Antikörper wie für Fluoreszenzkonjugate empfohlen; bei Erhalt wird das Produkt auf Eistüten versandt, um die Stabilität zu erhalten.

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