Ratten-Anti-Maus CD45R/B220 mAk für Durchflusszytometrie - P06800

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45R/B220 (Rezeptor-Tyrosinproteinphosphatase C)

• CD45R/B220 wird vom Ptprc-Gen kodiert und ist eine Rezeptor-Tyrosinproteinphosphatase C (PTPRC), auch bekannt als Leukozyten-Common-Antigen (L-CA), Lymphozytenantigen 5 (Ly-5) und T200. Durch alternatives Spleißen entstehen multiple Isoformen mit unterschiedlichen Molekulargewichten (z. B. 130, 140, 144 kDa).
• PTPRC fungiert als kritischer positiver Regulator der T-Zell-Aktivierung: Seine erste Phosphatase-Domäne besitzt enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität moduliert. Nach Bindung des T-Zell-Rezeptors rekrutiert und dephosphoryliert sie Signalmoleküle wie SKAP1 und FYN (gemäß Sequenzähnlichkeit).
• Außerdem dephosphoryliert sie die Src-Familien-Kinase LYN, moduliert dadurch die LYN-Kinaseaktivität und beeinflusst nachgeschaltete Signalkaskaden in Lymphozyten.
• Subzellulär ist PTPRC in der Zellmembran lokalisiert, angereichert in Membran-Lipid Rafts und konzentriert sich an der immunologischen Synapse zwischen T-Zellen und antigenpräsentierenden Zellen.
• PTPRC interagiert mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen an der Grenzfläche zwischen T-Zelle und dendritischer Zelle; diese Interaktion erkennt Tn-Antigen-tragendes CD45 auf Effektor-T-Zellen und passt den Schwellenwert für die T-Zell-Aktivierung an, um Autoreaktivität zu begrenzen.
• Das Protein wird glykosyliert und phosphoryliert, wie die Schlagworte Glykoprotein und Phosphoprotein belegen. Es ist ein transmembranes Protein vom Typ I mit einem Signalpeptid, einer großen extrazellulären Domäne, einer einzigen Transmembranhelix und zwei intrazellulären Phosphatase-Domänen.
• Bei Mäusen wird CD45R/B220 überwiegend auf B-Lymphozyten und einer Subpopulation von T-Zellen exprimiert, was es zu einem klassischen Marker für B-Zell-Linien in immunologischen Studien macht.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Bestimmen Sie für die Durchflusszytometrie die optimale Konzentration des -konjugierten Antikörpers durch Titration für Ihren spezifischen Zelltyp und Ihr Färbeprotokoll, da unspezifische Bindung durch korrekte Titration reduziert werden kann.
• Fügen Sie geeignete Isotypkontrollen (Ratten-IgG konjugiert mit dem gleichen Fluorophor) hinzu, um Kompensations- und Gating-Parameter in Mehrfarbenpanels einzustellen.
• Validieren Sie die Antikörperleistung an bekannten positiven und negativen Zellpopulationen (z. B. Maus-Splenozyten, bei denen B-Zellen CD45R/B220+ sind und T-Zell-Subpopulationen meist negativ sind).
• Aufgrund der großen extrazellulären Domäne und der multiplen Isoformen stellen Sie sicher, dass das rekombinante Immunogen dem von diesem Klon erkannten Epitop entspricht, wenn Kreuzreaktivität zwischen Isoformen kritisch ist.
• Lagern Sie den Antikörper bei 2–8°C geschützt vor Licht; vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen, um die Stabilität des Konjugats zu erhalten.

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