Kaninchen anti-Ratte CD4 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P05540

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD4-Funktion und Lokalisierung

• CD4, auch bekannt als T4/Leu-3 oder W3/25-Antigen, ist ein T-Zell-Oberflächenglykoprotein, das beim Menschen durch das Cd4-Gen codiert wird.
• Es fungiert als integrierter Membrankorezeptor für MHC-Klasse-II-Moleküle, interagiert mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und präsentiert Zellen, um Immunantworten einzuleiten.
• Nach Bindung an MHC rekrutiert CD4 die Src-Kinase LCK, was zu Phosphorylierungskaskaden führt, die die Aktivierung von T-Helferzellen, die Produktion von Lymphokinen und die Adhäsion fördern.
• CD4 ist entscheidend für die Differenzierung von T-Helferzellen im Thymus und kann auch die Reifung von Monozyten zu Makrophagen auf eine LCK-unabhängige Weise auslösen.
• Über T-Zellen hinaus beeinflusst die CD4-Expression in Makrophagen und NK-Zellen die Zytokinexpression und die Zellmigration.
• Das Protein befindet sich an der Zellmembran und verfügt über vier immunglobulinähnliche Domänen mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von ca. 51 kDa.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Bildung von Disulfidbrücken, Glykosylierung und Palmitoylierung, die für seine Struktur und Funktion wesentlich sind.
• CD4 ist ein Schlüsselmarker für die Identifizierung von Immunzelluntergruppen und ein primärer Rezeptor für den Eintritt von HIV beim Menschen (strukturelle Einblicke sind über das Schlüsselwort 3D-Struktur verfügbar).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Titrieren Sie für die Durchflusszytometrie den Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration für Ihre spezifische Zellpopulation und Ihren Versuchsaufbau zu bestimmen.
• Verwenden Sie geeignete Isotyp-Kontrollantikörper, die mit dem gleichen Fluorophor () konjugiert sind, um unspezifische Bindungen zu bewerten.
• Fügen Sie einen Vitalitätsfarbstoff hinzu, um tote Zellen auszuschließen, die aufgrund erhöhter Autofluoreszenz zu falsch-positiven Ergebnissen führen können.
• Lassen Sie die Färbung im Dunkeln bei 4°C inkubieren, um die Antigenmodulation und das Ausbleichen des Fluorophors zu minimieren.
• Da das Immunogen aus den Aminosäuren 1-394 besteht, erkennt der Antikörper wahrscheinlich ein extrazelluläres Epitop, das für Oberflächenfärbungen ohne Permeabilisierung geeignet ist. Überprüfen Sie die Leistung, wenn eine Permeabilisierung erforderlich ist.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität mithilfe von CD4-positiven (z. B. Ratten-Milzzellen oder Thymozyten) und CD4-negativen Kontrollen.

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