Kaninchen-anti-Maus-LAMP1/CD107a-monoklonaler Antikörper für IF/ICC, FC – P11438

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von LAMP1/CD107a

• Das lysosomenassoziierte Membran-Glykoprotein 1 (LAMP1/CD107a) ist ein stark glykosyliertes Transmembranprotein, das auch als LGP-120, P2B oder CD107a bezeichnet wird.
• Es ist essenziell für die Lysosomenbiogenese, die pH-Regulierung, die Autophagie und die Cholesterinhomöostase und wirkt als direkter Inhibitor des Protonenkanals TMEM175, um das saure Lumen aufrechtzuerhalten. Zugehörige Referenzen: PMID:15121881
• In natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) ist LAMP1 am Transport zytotoxischer Granula zur Zelloberfläche und am Perforin-Transport zu lytischen Granula beteiligt und ermöglicht dadurch die Abtötung von Zielzellen.
• Es schützt NK-Zellen vor degranulationsbedingten Schäden, indem es eine Selbstverletzung durch den Inhalt ihrer eigenen zytotoxischen Granula verhindert. Zugehörige Referenzen: PMID:23847195
• Es präsentiert Kohlenhydratliganden für Selektine und wurde mit der Metastasierung von Tumorzellen in Verbindung gebracht. Zugehörige Referenzen: PMID:2676155
• Es befindet sich hauptsächlich in den Membranen von Lysosomen und späten Endosomen, wird bei Aktivierung jedoch auch zur Zellmembran und zur Membran zytolytischer Granula transportiert.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören eine umfangreiche N-Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbindungen, die für seine strukturelle Stabilität und Funktion innerhalb der lysosomalen Umgebung entscheidend sind.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Verwenden Sie für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) eine geeignete Fixierung (z. B. 4 % PFA) und Permeabilisierung (z. B. 0,1 % Triton X-100), um den Zugang des Antikörpers zu den intrazellulären lysosomalen Kompartimenten zu ermöglichen. Das konjugierte Fluorophor macht einen Sekundärantikörper überflüssig und vereinfacht dadurch das Protokoll.
• In der Durchflusszytometrie (FC) befindet sich LAMP1 unter Ruhebedingungen überwiegend intrazellulär, kann jedoch nach zellulärer Aktivierung (z. B. bei der Degranulation von NK-Zellen) auf der Zelloberfläche nachgewiesen werden. Erwägen Sie, einen Schritt zur Zellaktivierung einzubauen und einen Viabilitätsfarbstoff zu verwenden, um tote Zellen auszuschließen.
• Validieren Sie den Antikörper in einer relevanten Maus-Zelllinie oder einem Primärzellensystem, von dem bekannt ist, dass es LAMP1 exprimiert (z. B. RAW-264.7-Makrophagen oder primäre NK-Zellen), und verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen für die FC.
• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 208–363 der Lumendomäne, die gegenüber Denaturierung empfindlich sein kann. Vermeiden Sie eine übermäßige Fixierung, da diese das Epitop maskieren könnte.

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