Kaninchen-anti-Maus-IgE-monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie (intrazellulär) – P06336

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der konstanten Region der schweren Kette von Maus-IgE

• Die konstante Immunglobulin-Epsilon-Region (schwere IgE-Kette) ist die konstante Region der schweren Immunglobulin-Epsilon-Ketten, die zusammen mit den leichten Ketten IgE-Antikörper bilden.
• IgE-Antikörper sind von B-Lymphozyten produzierte Glykoproteine; sie können als membrangebundene B-Zell-Rezeptoren oder als sezernierte Antikörper im Serum und in mukosalen Sekreten vorkommen.
• Die variablen Domänen der schweren und leichten Ketten werden durch V(D)J-Rekombination gebildet und durchlaufen nach Antigenkontakt eine somatische Hypermutation, wodurch eine Affinitätsreifung für spezifische Antigene ermöglicht wird.
• Membrangebundenes IgE auf B-Zellen dient als Antigenrezeptor; die Antigenbindung löst die klonale Expansion von B-Zellen und ihre Differenzierung zu antikörpersezernierenden Plasmazellen aus.
• Sezerniertes IgE vermittelt Effektorfunktionen durch Bindung an hochaffine Fc-Epsilon-Rezeptoren auf Mastzellen und Basophilen und spielt eine zentrale Rolle bei allergischen Reaktionen und der Abwehr von Parasiten.
• Die konstante Region von IgE enthält mehrere Immunglobulindomänen, und ihre Struktur wird durch Disulfidbindungen und N-verknüpfte Glykosylierung stabilisiert (UniProt-Schlüsselwörter: Disulfidbindung, Glykoprotein, Immunglobulindomäne).
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich IgE sowohl auf der Zellmembran (als B-Zell-Rezeptor) als auch sezerniert im extrazellulären Raum.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Dieser Antikörper ist direkt an , einen mit Standardgeräten für die Durchflusszytometrie kompatiblen, fernroten Fluoreszenzfarbstoff, konjugiert; er wird für die intrazelluläre Färbung empfohlen (FC intra).
• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 83–421 der konstanten Region von Maus-IgE, sodass der Antikörper nach der Permeabilisierung wahrscheinlich sowohl membrangebundene als auch sezernierte IgE-Formen erkennt.
• Optimieren Sie für die intrazelluläre Durchflusszytometrie die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen mithilfe geeigneter positiver und negativer Kontrollzellen (z. B. IgE-exprimierende Maus-B-Zellen im Vergleich zu IgE-negativen Lymphozyten).
• Erwägen Sie, eine Isotypkontrolle und einen Viabilitätsfarbstoff in das Panel aufzunehmen, um die spezifische Färbung zu unterscheiden.
• Beachten Sie bei der Planung von Mehrfarben-Panels, dass spektral APC und Alexa Fluor® 647 ähnelt; vermeiden Sie eine Ko-Färbung mit diesen Farbstoffen, sofern keine ordnungsgemäße Kompensation überprüft wurde.

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