Kaninchen anti-Maus CD68 mAk für IF/ICC und FZ - P31996

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD68-Funktion und -Lokalisierung

• CD68, auch bekannt als Makrosialin, Lamp4, gp110 oder Scard1, ist ein stark glycosyliertes Transmembranprotein, das zur Familie der lysosomalen/endosomalen Membranglycoproteine (LAMP) gehört.
• Es wird vorwiegend in Gewebemakrophagen und in geringerem Maße in dendritischen Zellen exprimiert und dient als klassischer Marker für diese phagozytischen Zelltypen.
• CD68 spielt eine Rolle bei phagozytischen Aktivitäten, nimmt am intrazellulären lysosomalen Stoffwechsel teil und vermittelt extrazelluläre Zell-Zell- und Zell-Pathogen-Interaktionen.
• Das Protein bindet gewebes- und organspezifische Lektine oder Selektine und erleichtert damit das Einwandern (Homing) von Makrophagen-Untermengen an spezifische Stellen im Körper.
• CD68 zirkuliert schnell zwischen Endosomen, Lysosomen und der Plasmamembran, ein Prozess, der es Makrophagen ermöglichen kann, über selektintragende Substrate oder andere Zellen zu kriechen.
• Subzellulär lokalisiert sich CD68 an Endosomenmembranen, Lysosomenmembranen und der Zellmembran, was seinem dynamischen Trafficking und seinen funktionellen Rollen entspricht.
• Das Protein enthält ein Signalpeptid, eine große luminäre/extrazelluläre Domäne mit Mucin-wiederholenden Sequenzen, eine einzelne Transmembranhelix und einen kurzen cytoplasmatischen Schwanz und unterliegt alternativem Spleißen und der Bildung von Disulfidbrücken.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Sie einen Permeabilisierungsschritt (z. B. mit Triton X-100 oder Saponin) in Betracht ziehen, um intrazelluläre CD68-Pools in Lysosomen/Endosomen zu detektieren, da sich das Protein in diesen Kompartimenten befindet.
• Für die Durchflusszytometrie (FZ) testen Sie sowohl Protokolle für lebende als auch für fixierte/permeabilisierte Zellen, um die oberflächenlokalisierte und die gesamte CD68-Expression zu erfassen. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration für Ihren spezifischen Zelltyp und Ihre experimentellen Bedingungen zu bestimmen.
• Verwenden Sie geeignete Isotyp-Kontrollen und Fluoreszenz-minus-eins (FMO)-Kontrollen, um die Färbespezifität zu bestätigen, insbesondere bei der Analyse von Makrophagen- und dendritischen Zellpopulationen.
• Da das Immunogen die Aminosäuren 21–291 von Maus-CD68 abdeckt (die extrazelluläre/luminäre Domäne umfassend), wird erwartet, dass der Antikörper das native Protein sowohl unter denaturierenden als auch unter nativen Bedingungen erkennt. Bestätigen Sie die Leistung jedoch in Ihrer spezifischen Anwendung durch Pilotexperimente.

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