Kaninchen-anti-Maus-CD45-monoklonaler Antikörper für IF/ICC, FC – P06800

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45

• CD45, auch als gemeinsames Leukozytenantigen (L-CA) und Ly-5 bekannt, ist eine rezeptorartige Protein-Tyrosin-Phosphatase, die auf der Oberfläche aller kernhaltigen hämatopoetischen Zellen exprimiert wird.
• Es spielt eine entscheidende Rolle bei der T-Zell-Aktivierung, indem es wichtige Signalmoleküle wie SKAP1, FYN und LYN dephosphoryliert und dadurch die Schwellenwerte der nachgeschalteten Signalübertragung moduliert.
• Durch seine Interaktion mit DPP4 wirkt CD45 als positiver Regulator der T-Zell-Koaktivierung und verstärkt die Signalübertragung des Antigenrezeptors.
• An der immunologischen Synapse interagiert CD45 mit CLEC10A auf dendritischen Zellen, erkennt Tn-antigenmodifiziertes CD45 auf Effektor-T-Zellen, stimmt dadurch die Aktivierung fein ab und begrenzt die Autoreaktivität.
• Das Protein enthält zwei tandemartig angeordnete intrazelluläre Phosphatasedomänen; die erste Domäne besitzt katalytische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität beeinflusst.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, darunter B220 (CD45R), die in verschiedenen Leukozytensubpopulationen unterschiedlich exprimiert werden und dadurch eine vielfältige funktionelle Regulation ermöglichen.
• CD45 ist an der Zellmembran, in Membranrafts und an der immunologischen Synapse lokalisiert, was seiner Rolle bei der Signaleinleitung und der Modulation von Korezeptoren entspricht.
• Umfangreiche posttranslationale Modifikationen, einschließlich N-Glykosylierung und Phosphorylierung, regulieren seine Stabilität, Ligandenbindung und Phosphataseaktivität.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Dieser Antikörper wurde gegen ein rekombinantes Protein hergestellt, das die Aminosäuren 26–566 von Maus-CD45 umfasst und damit die gesamte extrazelluläre Domäne abdeckt. Es wird erwartet, dass er ein extrazelluläres Epitop erkennt, wodurch er sich für die Färbung lebender Zellen in der Durchflusszytometrie ohne Permeabilisierung eignet.
• Für die Immunfluoreszenz können eine Standardfixierung (z. B. mit 4 % PFA) und eine optionale Permeabilisierung verwendet werden. Aufgrund der Transmembrantopologie von CD45 sollte eine Membranfärbung beobachtet werden.
• Da es sich um ein direktes -Konjugat handelt, ist kein Sekundärantikörper erforderlich. Die optimalen Titer sollten für jedes experimentelle System empirisch bestimmt werden, um eine spezifische Färbung bei minimalem Hintergrund zu erreichen.
• Aufgrund der hohen Expression von CD45 auf Leukozyten eignet sich dieser Antikörper ideal zur Identifizierung und zum Gating von Immunzellpopulationen in der Durchflusszytometrie. Geeignete Isotypen- und Fluoreszenz-minus-eins-Kontrollen (FMO-Kontrollen) sollten eingeschlossen werden.

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