Kaninchen anti-Maus CD45 monoklonaler Antikörper für IF/ICC und FC - P06800

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD45-Funktion und Lokalisierung

• CD45 (PTPRC) ist eine Rezeptor-Tyrosin-Proteinphosphatase, die für die T-Zell-Aktivierung über den Antigenrezeptor essentiell ist und als positiver Regulator der T-Zell-Koaktivierung nach Bindung an DPP4 wirkt.
• Das Protein enthält zwei Phosphatasedomänen: Die erste besitzt intrinsische enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität der ersten beeinflusst.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, einschließlich B220, einem bekannten Marker für B-Zellen und bestimmte aktivierte T-Zell-Subsets.
• CD45 ist vorwiegend in der Zellmembran lokalisiert, angereichert in Membranrafts und an der immunologischen Synapse, wo es die Signalübertragung moduliert.
• Nach Bindung des T-Zell-Rezeptors rekrutiert und dephosphoryliert CD45 nachgeschaltete Effektoren wie SKAP1 und FYN und moduliert die LYN-Aktivität.
• Die Interaktion mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen an der T-Zell-Kontaktstelle erkennt Tn-Antigen-tragendes CD45 und hilft, die Aktivierungsschwellen von T-Zellen fein abzustimmen und Autoreaktivität zu begrenzen.
• Das Protein ist stark glykosyliert und phosphoryliert und wird als Single-Pass-Typ-I-Membranprotein mit einem Signalpeptid, Tandemwiederholungsregionen und einer Transmembranhelix klassifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 26–566) von Maus-CD45 und deckt die Region ab, in der isoform-spezifisches alternatives Spleißen stattfindet; der Antikörper kann daher mehrere CD45-Isoformen erkennen.
• Für die Durchflusszytometrie sollte die Titration des Antikörpers an einer relevanten Zellpopulation (z. B. Maus-Milzzellen) in Betracht gezogen werden, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu ermitteln. Verwenden Sie geeignete Kontrollen (Isotypenkontrolle, Fluorescence Minus One), um CD45-positive Leukozyten genau zu gaten.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist für oberflächengefärbtes CD45 möglicherweise keine Permeabilisierung erforderlich, aber Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sollten für die Co-Färbung intrazellulärer Marker optimiert werden. Verwenden Sie einen farbrot-kompatiblen Filtersatz (z. B. 647 nm Laserlinie) für die Detektion.
• Obwohl für IF/ICC und FC validiert, könnte der Antikörper für andere Anwendungen geeignet sein; Endanwender sollten die Leistung jedoch in ihrem spezifischen Assaysystem mit dem relevanten Probentyp validieren.

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