Kaninchen-anti-Maus-CD366-(TIM-3)-mAk für die Durchflusszytometrie – Q8VIM0

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von CD366 (TIM-3)

• CD366 (TIM-3), auch bekannt als TIMD-3 oder Homolog des zellulären Rezeptors 2 für das Hepatitis-A-Virus, ist ein Typ-I-transmembranäres Glykoprotein der Immunglobulin-Superfamilie mit einer Muzindomäne, das bei Mäusen vom Havcr2-Gen kodiert wird. Es fungiert als Immun-Checkpoint-Rezeptor mit je nach zellulärem Kontext dualen inhibitorischen und stimulierenden Funktionen.
• TIM-3 reguliert Th1-vermittelte Autoimmun- und Alloimmunreaktionen negativ und fördert die immunologische Toleranz. Zugehörige Referenzen: PMID:14556006 PMID:18006747
• Die Bindung an seinen Liganden Galectin-9 (LGALS9) löst eine Apoptose und Suppression von T-Zellen aus, vermittelt durch die Phosphorylierung von HAVCR2 und die Dissoziation von BAG6, wodurch die antivirale und antitumorale Immunität moduliert wird. Zugehörige Referenz: PMID:22863785
• TIM-3 fungiert calciumabhängig als Rezeptor für Phosphatidylserin (PtSer), erleichtert die Phagozytose apoptotischer Zellen durch dendritische Zellen und fördert die Immuntoleranz. Zugehörige Referenzen: PMID:19224762 PMID:20083673
• In der angeborenen Immunität reguliert TIM-3 auf Makrophagen die Aktivierung und wirkt auf dendritischen Zellen synergistisch mit Toll-like-Rezeptoren, um die TNF-Sekretion zu steigern. In tumorinfiltrierenden dendritischen Zellen unterdrückt TIM-3 nukleinsäurevermittelte angeborene Immunreaktionen durch Interferenz mit HMGB1. Zugehörige Referenzen: PMID:11823861 PMID:18006747 PMID:22842346
• TIM-3 wird auch auf natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) exprimiert, wo es entweder die IFN-γ-Produktion als Reaktion auf LGALS9 kostimulieren oder die NK-vermittelte Zytotoxizität unterdrücken kann; seine negative regulatorische Rolle tritt beim LPS-induzierten Endotoxinschock besonders deutlich hervor. Zugehörige Referenz: PMID:25337993
• Überwiegend in der Zellmembran und an Zellverbindungen lokalisiert; durch alternatives Spleißen entsteht außerdem eine sezernierte Isoform. Während der Signalübertragung durchläuft das Protein eine N-Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Phosphorylierung.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Da das Immunogen die extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 20–191) umfasst, ist zu erwarten, dass dieser Antikörper TIM-3 auf der Oberfläche lebender, nicht permeabilisierter Zellen nachweist; überprüfen Sie dies in Ihrem Probensystem.
• Optimieren Sie für die Durchflusszytometrie die Antikörperkonzentration durch Titration an positiven (z. B. aktivierten Th1-Zellen) und negativen Kontrollen (naiven T-Zellen).
• ist ein rot angeregter Fluorophor, der mit Standardlasern im Bereich von 633–647 nm kompatibel ist; stellen Sie bei Multicolor-Panels mithilfe von Einzelfarbkontrollen eine korrekte Kompensation sicher.
• Erwägen Sie die Verwendung von Reagenzien zur Blockierung von Fc-Rezeptoren, um bei der Arbeit mit murinen Immunzellen eine unspezifische Bindung zu reduzieren.
• Die Expression von TIM-3 ist dynamisch; validieren Sie die Färbung unter geeigneten Stimulationsbedingungen (z. B. Aktivierung mit Anti-CD3/CD28) und in dem von Ihnen verwendeten Mausstamm.

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