Rabbit anti-Human/Monkey Ki67 Monoclonal Antibody für intrazelluläre Durchflusszytometrie - P46013

Kernprodukt-Spezifikationen und -Parameter

Biologischer Hintergrund: Ki67-Funktion und -Lokalisierung

• Das Proliferationsmarker-Protein Ki-67 (Antigen KI-67, MKI67) ist ein großes Kernprotein (358,7 kDa), das mit der Oberfläche mitotischer Chromosomen assoziiert ist und eine Doppelfunktion als Chromosomen-Repellens in der frühen Mitose und als Attraktant in der späten Mitose spielt.
• In der frühen Mitose bildet Ki-67 ausgedehnte Bürstenstrukturen auf den Chromosomen, verhindert deren Zusammenbruch zu einer einzigen Chromatinmasse durch sterische und elektrostatische Ladungsbarrieren und ermöglicht so eine unabhängige Chromosomenbeweglichkeit. Verwandte Referenzen: PMID:27362226
• Während der mitotischen Anaphase induzieren die Dephosphorylierung von Ki-67 und die Exposition einer konservierten basischen Region eine RNA-abhängige flüssig-flüssige Phasentrennung auf der Chromosomenoberfläche, wodurch es zu einem Chromosomen-Attraktanten wird, um das Clustering und den Ausschluss von Zytoplasmapartikeln aus dem zukünftigen Kernraum zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:32879492, PMID:39153474
• Ki-67 bindet DNA, bevorzugt supercoiled und AT-reiche DNA, und bindet auch vorzeitige ribosomale RNAs während der Anaphase, was zur Phasentrennung beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:10878551, PMID:28935370
• Das Protein lokalisiert sich in Chromosomen, dem Zellkern und während der Interphase prominent im Nukleolus.
• Es unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Isopeptidbindungsbildung, sowie alternativem Spleißen und Ubiquitinierung (Schlüsselwörter: Acetylierung, Alternatives Spleißen, Phosphoprotein, Ubl-Konjugation).
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen von MKI67, die zur funktionalen Vielfalt beitragen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Reste 2271–2370 von menschlichem Ki67 abdeckt, und stellt die Epitopspezifität für den intrazellulären Nachweis sicher.
• Optimieren Sie für die intrazelluläre Durchflusszytometrie gründlich die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, um dem Antikörper den Zugang zum nukleären Ki-67 zu ermöglichen und gleichzeitig die Epitopintegrität zu bewahren.
• Erwägen Sie eine Titrierung des -Konjugats, um die optimale Konzentration für Ihren Zelltyp und Ihr Färbeprotokoll zu ermitteln.
• Validieren Sie den Antikörper in proliferierenden menschlichen und Affenzellen, wobei Sie geeignete Isotypkontrollen sowie unstimulierte oder G0-arretierte Zellen als negative Kontrollen verwenden.
• Vermeiden Sie längere Lichteinwirkung, um den -Fluorophor zu schützen; befolgen Sie die Standardpraktiken für die Lagerung und Handhabung von konjugierten Antikörpern.

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