Kaninchen anti-Human/Affe Ki67 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P46013

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Ki67-Funktion und Lokalisierung

• Ki67 ist ein Kernprotein, das weit verbreitet als Proliferationsmarker verwendet wird und aufgrund von alternativem Spleißen in zwei Isoformen von etwa 319 kDa und 359 kDa vorliegt.
• Während der frühen Mitose verlagert sich Ki67 von den Nukleoli zur Chromosomenoberfläche und bildet eine bürstenartige Struktur, die durch sterische und elektrostatische Abstoßung eine Aggregation der Chromosomen verhindert und so die unabhängige Beweglichkeit der Chromosomen sicherstellt. Zugehörige Referenzen: PMID:27362226
• In der Anaphase löst eine Dephosphorylierung einen funktionellen Wechsel aus: Ki67 kollabiert in eine kondensierte Phase, die Chromosomen zusammenzieht, was die Reformation der Kernhülle und den Ausschluss zytoplasmatischer Partikel erleichtert. Zugehörige Referenzen: PMID:32879492 PMID:39153474
• Ki67 bindet während der Anaphase prä-ribosomale RNAs und fördert die Flüssig-Flüssig-Phasentrennung auf der Chromosomenoberfläche, was für die Chromosomenclusterbildung entscheidend ist. Zugehörige Referenzen: PMID:28935370 PMID:39153474
• Das Protein bindet zudem DNA mit einer Präferenz für supercoiled und AT-reiche Sequenzen, obwohl seine direkte Rolle bei der Chromatinorganisation noch unklar ist. Zugehörige Referenzen: PMID:10878551
• Subzelluläre Lokalisierung: Ki67 findet sich während der Interphase überwiegend im Nukleolus, assoziiert während der Mitose mit kondensierenden Chromosomen und bedeckt die gesamte Chromosomenoberfläche.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine mitotischen Funktionen und Stabilität regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 2271-2370 des humanen Ki67 entspricht und sich in der C-terminalen Region befindet. Stellen Sie sicher, dass das Ziel-Epitop unter den gewählten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen zugänglich ist.
• Verwenden Sie für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) Permeabilisierungspuffer, die mit Kernantigenen kompatibel sind. Schließen Sie geeignete Isotyp-Kontrollen ein und validieren Sie die Färbung in einer bekannten proliferierenden Zelllinie (z. B. HeLa, Jurkat) im Vergleich zu einer nicht-proliferierenden Kontrolle.
• Kreuzreaktivität mit Javaneraffen (Cynomolgus) ist dokumentiert; überprüfen Sie dies in Ihrem spezifischen experimentellen System, falls Sie mit anderen Spezies arbeiten.
• Der konjugierte Fluorophor ist ein Ersatz für Pacific Blue/eFluor 450; stellen Sie die Gerätekompatibilität sicher und vermeiden Sie längere Lichteinstrahlung.

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