Kaninchen-monoklonaler Antikörper gegen humanes/Affen-CD8a für Durchflusszytometrie – P01732

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD8a

• CD8A ist die CD8-Alpha-Kette des T-Zell-Oberflächenglykoproteins, auch bekannt als T8/Leu-2, das beim Menschen vom CD8A-Gen kodiert wird. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen.
• Seine Kernfunktion ist die eines integralen Membranglykoprotein-Korezeptors für MHC-Klasse-I-Moleküle. In T-Zellen interagiert es gleichzeitig mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und dem MHC-Klasse-I-Peptid-Komplex, rekrutiert die Src-Kinase LCK zum TCR-CD3-Komplex und initiiert intrazelluläre Signalwege, die zur Aktivierung von zytotoxischen T-Lymphozyten (CTL), zur Lymphokinproduktion und zur Adhäsion führen.
• CD8A-Homodimere auf natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) stellen einen Überlebensmechanismus bereit, ermöglichen die Konjugation und Lyse mehrerer Zielzellen und fördern die Differenzierung von aktivierten Lymphozyten zu Gedächtnis-CD8-T-Zellen.
• CD8A gehört zur Immunglobulin-Superfamilie und bildet typischerweise disulfidverknüpfte Heterodimere mit CD8B (der CD8-Beta-Kette) auf thymusabgeleiteten T-Zellen; Homodimere werden auch auf Untergruppen von Immunzellen exprimiert.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst die Zellmembran und eine sezernierte Form. Es handelt sich um ein einzügiges Typ-I-Membranprotein mit einem Signalpeptid, einer extrazellulären immunglobulinähnlichen Domäne, einer Transmembranhelix und einem zytoplasmatischen Schwanz.
• Gewebespezifität: Exprimiert auf zytotoxischen T-Zellen, einer Untergruppe von NK-Zellen, Gedächtnis-T-Zellen, intraepithelialen Lymphozyten, Monozyten, dendritischen Zellen und auf plasmazytoiden dendritischen Zellen nach Stimulation mit Herpes-simplex-Virus-1.
• Posttranslationale Modifikationen und Schlüsselwörter: Glykosyliert, palmitoyliert und enthält Disulfidbindungen. Annotiert als Glykoprotein, Lipoprotein, Disulfidbindung; beteiligt an der adaptiven Immunität, alternatives Spleißen; verknüpft mit Krankheitsvarianten.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die extrazelluläre Region (AS 22-182) abdeckt. Dieses Design führt wahrscheinlich zu Antikörpern, die Oberflächenepitope auf lebenden Zellen ohne Permeabilisierung erkennen, wodurch es gut für die direkte Durchflusszytometrie-Färbung (FC) geeignet ist.
• Titrieren Sie für die FC das -Konjugat, um die optimale Arbeitsverdünnung zu bestimmen. Fügen Sie geeignete Isotypkontrollantikörper und eine Fc-Rezeptorblockierung hinzu. Überprüfen Sie die Spezifität anhand bekannter CD8A-positiver Zelllinien (z. B. Jurkat) oder mononukleärer Zellen aus peripherem Blut.
• Es wurde eine Kreuzreaktivität mit Kynolongusäffen nachgewiesen. Wenn Sie Proben von Kynolongusäffen verwenden, validieren Sie den Antikörper in Ihrem eigenen Assaysystem mit geeigneten Kontrollen.
• Es wurden mehrere Proteingewichte (21, 25, 30 kDa) angegeben; diese spiegeln wahrscheinlich unterschiedlich glykosylierte Formen oder Isoformvarianten wider. Wenn Sie als Bestätigungsschritt einen Western Blot durchführen, rechnen Sie mit dem Auftreten mehrerer Banden.
• Bestätigen Sie bei mehrfarbigen Durchflusszytometrie-Panels eine minimale spektrale Überlappung mit anderen Fluorophoren und verwenden Sie Kompensationskontrollen. Die Eigenschaft als kaninchen-monoklonaler Antikörper und die direkte Konjugation erleichtern reproduzierbare Ergebnisse.

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