Kaninchen anti-Mensch/Affe CD4 Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P01730

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von CD4

• CD4 ist ein 51 kDa großes Transmembranglykoprotein des Typs I, das zur Immunglobulin-Superfamilie gehört. Es wird auf der Oberfläche von T-Helferzellen, Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen exprimiert und ist ein Markierungsmerkmal von Helfer-T-Lymphozyten.
• Als Korezeptor bindet CD4 an MHC-Klasse-II-Moleküle auf antigenpräsentierenden Zellen und interagiert gleichzeitig mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR), um die Src-Kinase LCK zu rekrutieren. Dies initiiert Signalkaskaden, die zur T-Zell-Aktivierung, Zytokinproduktion und Differenzierung führen.
• Im Thymus ist CD4 an der positiven Selektion und Linienbindung von CD4+ T-Helferzellen beteiligt und essenziell für die adaptive Immunität.
• CD4 dient als primärer Rezeptor für HIV-1 und vermittelt den Eintritt des Virus in Wirtszellen; es wird anschließend durch das HIV-1-Hilfsprotein Vpu herunterreguliert, um der Immunabwehr zu entgehen. Verwandte Referenzen: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169
• CD4 wirkt auch als zellulärer Rezeptor für den Eintritt des menschlichen Herpesvirus 7 (HHV-7). Verwandte Referenzen: PMID:7909607
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung, Disulfidbindungsbildung in seinen extrazellulären Ig-ähnlichen Domänen und Palmitoylierung an einem zytoplasmatischen Cysteinrest, die die Membranlokalisation und Signalgebung modulieren.
• Das Protein lokalisiert überwiegend über eine einpassige Transmembranhelix an der Plasmamembran, wobei seine extrazelluläre Region in vier immunglobulinähnliche Domänen (D1–D4) organisiert ist, die für Ligandeninteraktionen entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das zur Herstellung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein rekombinantes humanes CD4-Protein; daher erkennt der Antikörper native konformationsabhängige Epitope und ist geeignet für die Oberflächenfärbung in der Durchflusszytometrie.
• Titrieren Sie für FC-Anwendungen den Antikörper mit humanen oder krabbenmakaken peripheren Blutmononukleären Zellen (PBMC), um die optimale Konzentration zu bestimmen. Fügen Sie geeignete Isotyp-Kontrollen hinzu und führen Sie bei Bedarf eine Fc-Rezeptor-Blockierung durch.
• Eine Vollblutfärbung oder Färbung von Einzelzellsuspensionen aus lymphoidem Gewebe kann in Betracht gezogen werden, nach Standardprotokollen mit geeigneten Antikoagulanzien und Vitalitätsfarbstoffen.
• Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte sollten validiert werden, da sie die Epitopzugänglichkeit verändern können; für intrazelluläre Färbung verwenden Sie Protokolle, die für membranständige Antigene optimiert sind.
• Stellen Sie sicher, dass die Kompensationseinstellungen des Geräts für das Fluorophor korrekt kalibriert sind, um spektrale Überlappung zu vermeiden, insbesondere in mehrfarbigen Panels.

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